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  • 微生物學技術:紫外線滅菌實驗

    標簽:紫外線滅菌紫外線滅菌是用紫外線燈進行的,波長為200~300nm的紫外線都有殺菌能力,其中以260nm的殺菌力zui強。在波長一定的條件下,紫外線的殺菌效率與強度和時間的乘積成正比。紫外線殺菌機制主要是因為它誘導了胸腺嘧啶二聚體的形成,從而抑制了DNA的復制。實驗方法紫外線滅菌實驗方法原理由于輻射能使空氣中的氧電離成[O],再使O2氧化生成臭氧(O3)或使水(H2O)氧化生成過氧化氫(H2O2),O3和H2O2均有殺菌作用。紫外線穿透力不大,所以,只適用于無菌室、接種箱、手術室內的空氣及物
  • 微生物學技術:用比濁法測定大腸桿菌的生長曲線

    (一)實驗目的了解細菌生長曲線的持點及測定原理,學會用比濁法測定細菌的生長曲線。(二)實驗原理將一定數量的細菌,接種于適宜的液體培養基中,在適溫下培養,定時取樣測數,以菌數的對數為縱坐標,生長時間為橫坐標,作出的曲線稱為生長曲線。該曲線表明細菌在一定的環境條件下群體生長與繁殖的規律。一般分為延緩期、對數期、穩定期及衰亡期四個時期,各時期的長短同菌種本身特征、培養基成分和培養條件不同而異。比濁法是根據細菌懸液細胞數與混濁度成正比,與透光度成反比關系,利用光電比色計測定細胞懸液的光密度(即OD值),
  • 微生物學技術:PCR法檢測支原體

    PCR法是20世紀80年代中期建立起來的一種體外DNA擴增技術,其基本原理是酶促DNA合成反應,即在DNA模板、引物和脫氧核糖核酸存在下,經DNA聚合酶的作用,使DNA鏈擴增延伸。該方法具有靈敏度高、特異性強、快速的特點,但其對實驗環境的要求嚴格,實驗成本較高,有時還有假陽性的現象出現。1、儀器設備超凈工作臺、PCR儀、電泳儀、凝膠成像分析系統、臺式離心機、旋渦混懸器等。2、實驗試劑選用美國Stratagene公司生產的支原體檢測試劑盒(內有引物、陽性對照、內對照、StrataCleanresi
  • 微生物學技術:高壓蒸汽滅菌實驗

    標簽:高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內,通過加熱,使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中驅盡,然后關閉排氣閥,繼續加熱,此時由于蒸汽不能溢出,而增加了滅菌器內的壓力,從而使沸點增高,得到高于100℃的溫度。導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。實驗方法高壓蒸汽滅菌實驗實驗方法原理在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時,滅菌鍋內冷空氣的排除是否*極為重要,因為空氣的膨脹壓大于水蒸汽的膨脹壓,所以,當水蒸汽中含有空氣時,在同一壓力下,含空氣蒸
  • 微生物學技術:微生物的接種、分離和培養

    一、目的要求1、掌握各種分離、接種方法。2、掌握無菌操作基本環節。二、實驗說明微生物在自然界中呈混雜狀態存在,要獲得所需菌種,必需從中把它們分離出來。在保存菌種時不慎受到到污染也需予以分純。微生物分離和純化的方法很多,但基本原理卻是相似的,即將待分離的樣品進行一定的稀釋,并使微生物的細胞(或孢子)盡量以分散狀態存在,然后使其長成一個個純種單菌落。然而上述工作又離不開接種,即將一種微生物移到另一滅過菌的培養基上的過程。三、實驗材料1、恒溫培養箱。2、接種環、玻璃棒、吸管、酒精燈。3、培養基(上次實
  • 微生物學技術:微生物鑒定中常用的生化反應

    實驗原理有些細菌具有合成淀粉酶的能力,可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解為麥芽糖和葡萄糖,淀粉水解后遇碘不再變藍色。細菌產生的脂肪酶能分解培養基中的脂肪生成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培養基pH下降,可通過在油脂培養基中加入中性紅做指示劑進行測試。中性紅指示范圍為pH6.8(紅)~8.0(黃)。當細菌分解脂肪產生脂肪酸時,則菌落周圍培養基中出現紅色斑點。某些細菌分泌蛋白酶分解明膠,產生小分子物質。如果細菌具有分解明膠的能力,則培養基可由原來固體狀態變成液體狀態。牛乳中主要含有乳糖、酪蛋白等成
  • 微生物學技術:微生物的分離純化及稀釋平板菌落計數

    實驗原理稀釋平板測數是根據微生物在高度稀釋條件下固體培養基上所形成的單個菌落是由一個單細胞繁殖而成這一培養特征設計的計數方法,即一個菌落代表一個單細胞。計數時,首先將待測樣品制成均勻的繁殖稀釋液,盡量使樣品中的微生物細胞分散開,使其成單個細胞存在,否則一個菌落就不只是代表一個細胞,再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中,使其均勻分布于平板中的培養基內。經培養后,由單個細胞生長繁殖形成菌落,統計菌落數目,即可計算出樣品中的含菌數。此記數方法所計算的菌數是培養基上長出來的菌落數,故又稱活菌計數。
  • 免疫學技術專題:非標記抗體免疫電鏡技術

    一、原理標記抗體法雖然具有許多優點,但也存在一些難以克服的問題,如標記抗體的分子增大,對細胞膜和組織的穿透力減弱;化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響;結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合,影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素,通過一系統的非標記抗體的免疫學反應,對組織中的抗原進行定位檢測。不標記抗體法又可分為用標記物顯示和不同標記物顯示兩種方法。前者利用基因工程方法制備雙特異性抗體的F(ab′)2,一個Fab片段與標本中的抗原結合,一個Fab是抗體蛋白的結合片段。在抗
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