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原理：細(xì)胞接種存活率只表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞數(shù)，但貼壁后的細(xì)胞不一定每個都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細(xì)胞必為貼壁和有增殖活力的細(xì)胞。克隆形成率反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。由于細(xì)胞生物學(xué)性狀不同，細(xì)胞克隆形成率差別也很大，一般初代培養(yǎng)細(xì)胞克隆形成率弱，傳代細(xì)胞系強(qiáng)；二倍體細(xì)胞克隆形成率弱，轉(zhuǎn)化細(xì)胞系強(qiáng)；正常細(xì)胞克隆形成率弱，腫瘤細(xì)胞強(qiáng)。并且克隆形成率與接種密度有一定關(guān)系，做克隆形成率測定時，接種細(xì)胞一定要分散成單細(xì)胞懸液，直接接種在碟皿中，持續(xù)一周，隨時檢查，到細(xì)胞形成克隆時終
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細(xì)胞技術(shù)專題：細(xì)胞增殖檢測：3H同位素滲入法實例
一、原理淋巴細(xì)胞在有絲分裂原PHA、ConA等的刺激下，產(chǎn)生增殖反應(yīng)，DNA和RNA合成明顯增加，如在培養(yǎng)液中加入3H－胸腺嘧啶核苷（3H-TdR），則可被轉(zhuǎn)化中的細(xì)胞攝入。測定標(biāo)記淋巴細(xì)胞的放射強(qiáng)度可反映淋巴細(xì)胞增殖的程度。二、儀器和材料RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液、小牛血清、2-巰基乙醇（2-ME）、青霉素、鏈霉素、刀豆蛋白A（ConA）、Hank's液、PBS緩沖液（pH7.2-7.4）、3H-TdR、閃爍液[2，5-二苯基惡唑（PPO）0.5g、1，4-雙-（5-苯基惡唑基）-苯（POP -
標(biāo)簽：四唑鹽MTT比色MTT法建立于20世紀(jì)80年代初，是一種通過測定細(xì)胞能量代謝水平用以間接反映細(xì)胞增殖情況的檢測方法。它基于兩個假設(shè)：1、只有活細(xì)胞能夠?qū)TT還原成為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物，而死細(xì)胞不能達(dá)到；2、其吸光度與活細(xì)胞數(shù)量成直線正相關(guān)。實驗方法MTT法實驗方法原理活細(xì)胞的線粒體中的琥珀脫氫酶能使外源性的MTT還原為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜能溶解細(xì)胞中的紫色結(jié)晶物，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞
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根據(jù)細(xì)胞生長的恃點，傳代方法有3種：懸浮生長細(xì)胞傳代、半懸浮生長細(xì)胞傳代（Hela細(xì)胞）、貼壁生長細(xì)胞傳代。實驗方法細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)消化法實驗方法原理培養(yǎng)細(xì)胞傳代根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的方法。貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代；部分貼壁生長的細(xì)胞用直接吹打可傳代；懸浮生長的細(xì)胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打傳代。實驗材料細(xì)胞試劑、試劑盒D-Hanks液小牛血清RPMI1640雙抗胰蛋白酶EDTANHClNaHCO3儀器、耗材凈化工作臺離心機(jī)恒溫水浴箱冰箱倒置相差顯微鏡培養(yǎng)箱
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細(xì)胞技術(shù)專題：大鼠肝星狀細(xì)胞培養(yǎng)實驗
實驗方法細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)實驗方法原理選用Wistar大鼠經(jīng)消化酶灌注肝臟后,用分離液分離HSC，通過觀察其自發(fā)熒光及其顯著特征性結(jié)構(gòu)的脂肪染色、細(xì)胞免疫化學(xué)染色等方法鑒定。實驗材料雄性SD大鼠試劑、試劑盒戊巴比妥鈉小牛血清DMEM酶消化液I、ⅡNycodenzD-Hanks’液HBSS臺盼蘭儀器、耗材手術(shù)器械尼龍網(wǎng)相差顯微鏡熒光顯微鏡實驗步驟一、實驗步驟1.大鼠腹腔麻醉后在超凈臺上剖腹，進(jìn)行門靜脈插管。2.以D-Hanks’液灌注，同時剪開下腔靜脈，沖掉血液后，改灌以100ml酶消化液I(0.05% -
細(xì)胞技術(shù)專題：大鼠星型膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)實驗
標(biāo)簽：大鼠星型膠質(zhì)大鼠星型膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)可以：（1）用于神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、分化及再生等基礎(chǔ)研究；（2）腦缺血預(yù)處理上調(diào)神經(jīng)保護(hù)蛋白的機(jī)制研究；（3）腦損傷和腦疼痛的研究；（4）新蛋白的功能研究。實驗方法酶消化法胰酶消化法胰蛋白酶消化法實驗方法原理大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)后，作膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定，應(yīng)用缺氧D-Hank液及缺氧培養(yǎng)罐行OGD后用臺盼藍(lán)染色及乳酸脫氫酶(LDH)漏出率檢測細(xì)胞損傷程度。實驗材料Wistar大鼠乳鼠試劑、試劑盒FBSDMEM胰蛋白酶EDTA酒精儀器 -
細(xì)胞技術(shù)專題：神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)實驗
標(biāo)簽：神經(jīng)膠質(zhì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)可以：（1）獲得神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞；（2）用于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞電生理特性，如膜電位、去極化等；（3）用于免疫應(yīng)答研究。實驗方法酶消化法胰蛋白酶消化法實驗方法原理神經(jīng)細(xì)胞（神經(jīng)元）不易培養(yǎng)，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或加入神經(jīng)生長因子和膠質(zhì)細(xì)胞因子時，可出現(xiàn)一定程度的分化，長出突起等現(xiàn)象，但很難使之增值。而神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)組織中比較容易培養(yǎng)的成分。實驗材料大鼠試劑、試劑盒MEMFBS胰酶EDTAD-Hanks’液儀器、耗材眼科剪滴管離心機(jī)培養(yǎng)皿CO2培養(yǎng)箱實驗步驟 -
細(xì)胞技術(shù)專題：大鼠大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)實驗
標(biāo)簽：大鼠大腦皮層神經(jīng)元大鼠大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)可以：（1）獲得大鼠大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞；（2）用于神經(jīng)元細(xì)胞定向分化研究；（3）用于神經(jīng)元細(xì)胞凋亡研究。實驗方法機(jī)械性劃割培養(yǎng)酶消化法實驗方法原理SD胎鼠腦皮層神經(jīng)元體外培養(yǎng)7d，微量移液器塑料滴頭于培養(yǎng)孔內(nèi)機(jī)械性劃割培養(yǎng)之神經(jīng)元，依劃割程度不同分為輕、中、重3組，對照組除不進(jìn)行機(jī)械性劃割，其余處理同損傷組，傷后不同時間點（10，30min，1，3，6，12，24h）檢測細(xì)胞存活率及培養(yǎng)液上清乳酸脫氫酶(LDH)含量。實驗材料SD大鼠試劑、試劑盒
