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  • 單細胞凝膠電泳標準操作

    實驗原理在細胞核中,DNA是環狀附著在核基質上,細胞裂解過程中,核基質被溶解、抽提,DNA的結構則未發生變化。如果DNA鏈上存在缺口,則使DNA超螺旋變的松弛,DNA環向外展,同時由于暴露了陰電荷,在電場力的作用下,松動的DNA環向陽極遷移,但是由于這種松動的DNA環一端仍附著于核DNA,其遷移距離受到限制,因此尾長并不總是真實反映鏈缺口的多少。實際應當依靠尾長與尾部的熒光強度同時來進行分析。實驗步驟1.分離制備單細胞懸液:1)體外培養的細胞株:用胰酶消化,吹打成單細胞懸液;2)體內臟器細胞:處
  • RNAi實驗原理與方法

    通過生化和遺傳學研究表明,RNA干擾包括起始階段和效應階段(inititationandeffectorsteps)。在起始階段,加入的小分子RNA被切割為21-23核苷酸長的小分子干擾RNA片段(smallinterferingRNAs,siRNAs)。證據表明;一個稱為Dicer的酶,是RNaseIII家族中特異識別雙鏈RNA的一員,它能以一種ATP依賴的方式逐步切割由外源導入或者由轉基,病毒感染等各種方式引入的雙鏈RNA,切割將RNA降解為19-21bp的雙鏈RNAs(siRNAs),每個
  • 酸性磷酸酶的顯示方法

    實驗試劑1.10%中性福爾馬林(pH6.8~7.1)甲醛10ml蒸餾水90ml醋酸鈉2g2.酸性磷酸酶作用液蒸餾水90ml0.2mol/L醋酸緩沖液(pH4.6)12ml5%*2ml3.2%β—甘油磷酸鈉4ml先將蒸餾水和醋酸緩沖液混合,隨后分成大致相等的兩份,一份中加*溶液,另一份加甘油磷酸鈉溶液,然后再將兩者緩緩混合,邊混邊攪勻后若酸堿度值不到pH5.0,可加少量醋酸的調整。此作用液在臨用前配制,不能貯存。配好后的作用液應透明無絮狀懸浮物和沉淀,否則將嚴重影響實驗結果。4.1%硫化胺溶液硫化
  • IEF分離蛋白質

    實驗試劑樣品提取液(8M尿素、2%非離子型去污劑NP-40、2%Ampholin,pH3.5-10、2%DTT)膠母液(30%的29/1的Acr/Bis),兩性電解質陽極緩沖液1M磷酸陰極緩沖液1M氫氧化鈉固定液(10%的三氯、1%的磺基水楊酸)染色液(35%乙醇、10%冰醋酸、0.15%考馬氏亮藍R250)脫色液(35%乙醇、10%冰醋酸)實驗設備高壓電泳儀、IEF槽、離心機等實驗步驟1.樣品提取1)1ml原核表達細胞液離心取沉淀2)沉淀用100ulIEF樣品緩沖液裂解,離心取上清2.制膠1)
  • 土壤中有機氯農藥的分析方法

    實驗試劑丙酮、正己烷(J.T.Baker公司)均為農殘級;甲醇(Fisherchemical公司)為色譜純;銅片為分析純(臨用時,先用6mol/L的鹽酸去除其氧化層,用去離子水洗至中性,然后依次用甲醇、丙酮、正己烷洗滌3次);無水硫酸鈉為分析純(400℃烘4h,冷卻后儲于密閉容器中);硅膠為分析純(先用甲醇洗滌,然后用二氯甲烷洗滌,在110℃烘干過;使用前在250℃烘24h,冷卻后儲于密閉容器中)。Florisil小柱(SUPELCO公司),1000mg(6mL);20種有機氯混合標準溶液(Ac
  • ABO血型的鑒定

    實驗原理ABO血型是根據紅細胞表面存在的凝集原決定的。存在A凝集原的稱為A血型,存在B凝集原的稱為B血型。而血清中還存在凝集素。當A凝集原與抗A凝集素相遇或B凝集原與抗B凝集素相遇時,會發生紅細胞凝集反應。一般A型標準血清中含有抗B凝集素,B型標準血清中含有抗A凝集素,因此可以用標準血清中的凝集素與被測者紅細胞反應,以確定其血型。同種動物不同個體的紅細胞凝集稱為同族血細胞凝集作用。不同動物的血液互相混合有時也可產生紅細胞凝集,稱為異族血細胞凝集作用。對于動物的天然血型抗體了解不多,而且免疫效價也
  • 霉菌的形態觀察

    實驗原理霉菌菌絲較粗大,細胞易收縮變形,而且孢子很容易飛散,所以制標本時常用乳酸石炭酸棉藍染色液。此染色液制成的霉菌標本片其特點是:(a)細胞不變形;(b)具有殺菌防腐作用,且不易干燥,能保持較長時間;(c)溶液本身呈藍色,有一定染色效果。霉菌自然生長狀態下的形態,常用載玻片觀察,此法是接種霉菌孢子于載玻片上的適宜培養基上,培養后用顯微鏡觀察。此外,為了得到清晰、完整、保持自然狀態的霉菌形態還可利用玻璃紙透析培養法進行觀察。此法是利用玻璃紙的半透膜特性及透光性,將霉菌生長在覆蓋于瓊脂培養基表面的
  • 玫瑰花環試驗

    實驗原理動物T淋巴細胞表面具有結合異種動物紅細胞的受體,稱為E受體,在體外一定條件下,能與綿羊等動物的紅細胞結合,形成以T細胞為中心,紅細胞環繞在周圍,宛似一朵玫瑰花樣的花環,故取名為E玫瑰花環試驗(erythrocyterosettesassay)或自然花環形成試驗。凡能與RBC形成E花環的淋巴細胞稱E花環形成細胞(Erosetteformingcell,ERFC)。目前*綿羊紅細胞(SRBC)受體是人、騾、牛、山羊、豬等T淋巴細胞的特異標志,ERFC就是T細胞。這種玫瑰花環形成不需任何物質的
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