本文要點(diǎn)：在肺癌手術(shù)中，腫瘤邊界的確定和切緣距離的確定是非常重要的。在以往的研究中，系統(tǒng)應(yīng)用熒光探針可以幫助醫(yī)療人員確定腫瘤邊界，發(fā)現(xiàn)小腫瘤和轉(zhuǎn)移灶，從而提高手術(shù)切除的準(zhǔn)確性。本文開發(fā)了一種新的技術(shù)，可以在手術(shù)中快速識別切除肺組織中的腫瘤區(qū)域，區(qū)分腫瘤邊界和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)。近紅外二區(qū)小動物活體成像系統(tǒng) - MARS

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：在動物實(shí)驗(yàn)中，建立了肺癌的PDX模型。手術(shù)切除荷瘤小鼠的腫瘤、肺和瘤周肌肉組織，用靶向表皮生長因子受體(EGFR)探針孵育20分鐘，然后用封閉場近紅外II區(qū)(NIR-II)熒光成像系統(tǒng)成像。臨床標(biāo)本為10例根zhi肺癌患者手術(shù)切除的10個肺組織和60個淋巴結(jié)，術(shù)中切除后立即用靶向探針進(jìn)行培養(yǎng)并成像，以識別腫瘤區(qū)域，區(qū)分腫瘤邊界和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)。HE染色和免疫組化證實(shí)了熒光成像的準(zhǔn)確性。

結(jié)果：體外動物成像實(shí)驗(yàn)顯示腫瘤組織熒光增強(qiáng)。對于臨床樣本，本文的結(jié)果表明，這種新技術(shù)在識別切除肺組織中的腫瘤區(qū)域時具有超過85.7%的敏感性和一百%的特異性。腫瘤與背景的平均熒光比為2.5±1.3。此外，本文還將該技術(shù)應(yīng)用于術(shù)中轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)成像，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)的熒光比正常淋巴結(jié)更亮，腫瘤與背景的平均熒光信號比為2.7±1.1。計(jì)算熒光信號與轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)數(shù)量的關(guān)系，靈敏度為77.8%，特異性為92.1%。這項(xiàng)新技術(shù)有望成為快速術(shù)中病理檢測和切緣確定的有用診斷工具。

總結(jié)：利用熒光標(biāo)記的抗人EGFR重組抗體scFv片段在手術(shù)中孵育新分離的組織，探針可快速積累在肺癌組織中，可用于快速識別切除肺組織中的腫瘤區(qū)域，區(qū)分腫瘤邊界和淋巴結(jié)內(nèi)的轉(zhuǎn)移灶。該技術(shù)有望用于術(shù)中快速病理檢測和切緣測定。

背景：肺癌是男性和女性zui常見的癌癥之一，是對人群健康和生命構(gòu)成嚴(yán)重威脅的惡性腫瘤。手術(shù)切除腫瘤是目前肺癌治療的主要方法之一，因此提高手術(shù)切除的準(zhǔn)確性對降低肺癌死亡率至關(guān)重要。手術(shù)前，借助磁共振成像(MRI)和計(jì)算機(jī)斷層掃描（CT）或PET-CT成像來確定位置和肺癌的大小。然而，在手術(shù)過程中，很難確定被切除的組織是否是腫瘤以及手術(shù)邊緣是否殘留有腫瘤細(xì)胞。先前的研究表明，術(shù)中熒光成像可作為外科醫(yī)生進(jìn)行腫瘤切除手術(shù)的實(shí)用輔助工具。熒光探針的臨床應(yīng)用主要包括全身應(yīng)用和局部應(yīng)用兩大類。全身應(yīng)用是指直接將熒光探針引入體內(nèi)，如ICG和OLT-38。局部應(yīng)用是指將熒光探針局部噴涂、涂抹到腫瘤區(qū)域的方法。該方法操作簡單，不良反應(yīng)率低。然而，與肺癌相關(guān)的局部應(yīng)用研究鮮有報(bào)道。

術(shù)中病理診斷是在有xian時間內(nèi)進(jìn)行術(shù)中決策的必要條件；診斷結(jié)果使醫(yī)務(wù)人員能夠制定進(jìn)一步的手術(shù)計(jì)劃。術(shù)中冷凍切片(IFS)技術(shù)因其準(zhǔn)確、可靠、可降低再手術(shù)率等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于術(shù)中病理診斷。然而，IFS也存在一些缺點(diǎn)，如對冷凍切片樣品的質(zhì)量要求非常高。在以往的研究中，熒光成像被用于輔助病理標(biāo)本的選擇。在全身注射靶向熒光劑后，可以對手術(shù)標(biāo)本進(jìn)行非侵入性成像，客觀地確定腫瘤位于離標(biāo)本深表面最近的位置，然后外科醫(yī)生可以利用這一信息立即切除額外的組織或?qū)⒖梢蓞^(qū)域的組織樣本送往IFS進(jìn)行進(jìn)一步評估。受此研究啟發(fā)，作者認(rèn)為局部應(yīng)用靶向熒光探針實(shí)現(xiàn)術(shù)中有效病理診斷可能更有吸引力，因?yàn)檫@種方法操作簡單，不良反應(yīng)率較低。

本文提出了一種新的方法來實(shí)現(xiàn)腫瘤病灶的快速熒光成像。在手術(shù)進(jìn)行過程中，作者將新切除的肺組織與表皮生長因子受體(EGFR)靶向熒光探針孵化，并成功地使用NIR-II熒光成像系統(tǒng)準(zhǔn)確地可視化腫瘤的位置和邊界。接下來，作者測試了此方法檢測淋巴轉(zhuǎn)移的能力。該方法可幫助醫(yī)護(hù)人員測量切緣距離，發(fā)現(xiàn)切緣內(nèi)殘留的腫瘤細(xì)胞，制定進(jìn)一步的手術(shù)方案。

研究內(nèi)容：作者首先量化了EGFR在人外科生物標(biāo)本中的表達(dá)(n= 30)。在所有標(biāo)本中，分析了腫瘤和正常肺組織，發(fā)現(xiàn)與正常肺組織相比，腫瘤中EGFR表達(dá)明顯增加(Figure 1a)。腫瘤組織EGFR陽性區(qū)域平均值為31.4%±3.8%(平均±SD)，顯著高于正常肺組織(20.1%±3.1%，P < 0.001;Wilcoxon檢驗(yàn))(Figure 1b)。

Figure 1

作者接著完成了EGFR靶向熒光探針的合成及表征。采用抗人EGFR重組抗體scFv片段與近紅外熒光染料IRDye800CW偶聯(lián)制備EGFR-IRDye800CW。IRDye800CW是一種近紅外熒光染料，具有廣泛的吸收峰(778 nm)和發(fā)射峰(794 nm)，具有良好的生物安全性。隨后初步評價了EGFR-IRDye800CW的光譜特性。如Figure 2a所示，EGFR-IRDye800CW的吸收光譜峰為790 nm。與IRDye800CW相比，EGFR-IRDye800CW在260 nm處的吸收峰增強(qiáng)，表明IRDye800CW成功偶聯(lián)到抗人EGFR重組抗體scFv片段上。如Figure 2b和c所示，在接近生理?xiàng)l件下(PBS緩沖液，pH = 7.4)，EGFR-IRDye800CW的熒光信號范圍為800 ~ 1200 nm，峰值發(fā)射在818 nm。EGFR-IRDye800CW的NIR-II熒光成像進(jìn)一步顯示，當(dāng)濃度從1 × 10?2增加到1 × 10?1 mg/mL時，熒光信號呈線性增加(R2 = 0.9981，F(xiàn)igure 2d)。透射電鏡(TEM)圖像顯示，EGFR-IRDye800CW的平均粒徑約為10.57 nm(Figure 2e)。通過DLS測量，EGFR-IRDye800CW的水化粒徑增大了27.2 nm。采用生物分子層干涉法(BLI)檢測EGFR-IRDye800CW與抗人EGFR重組抗體scFv片段的結(jié)合性。EGFR-IRDye800CW的Kd（結(jié)合常數(shù)）為0.545 nM，抗人EGFR重組抗體scFv片段的Kd為0.529 nM。由以上結(jié)果可知，抗體與染料偶聯(lián)后，純度略有下降。

Figure 2

作者繼續(xù)測定EGFR-IRDye800CW的體外細(xì)胞靶向能力和細(xì)胞攝取。使用western blotting檢測兩種人肺癌細(xì)胞系：HCC827細(xì)胞(腺癌)和NCI-H520細(xì)胞(鱗狀細(xì)胞癌)中的EGFR表達(dá)。如Figure 3a和b所示，western blot數(shù)據(jù)顯示，HCC827細(xì)胞系的EGFR表達(dá)量是NCI-H520細(xì)胞系的2.1倍，表明EGFR在HCC827細(xì)胞系中呈高表達(dá)，兩細(xì)胞系間存在顯著性差異(P<0.001)。為了測試熒光探針EGFR-IRDye800CW的靶向能力，作者在探針100 nM濃度下培養(yǎng)HCC827 (EGFR陽性)和NCI-H520 (EGFR陰性)細(xì)胞3小時。然后，用共聚焦激光掃描顯微鏡對EGFR配體誘導(dǎo)的內(nèi)吞運(yùn)輸進(jìn)行熒光成像。如Figure 3c所示，在HCC827細(xì)胞中觀察到EGFR-IRDye800CW探針明顯的紅色熒光信號，而在NCI-H520細(xì)胞中觀察到紅色熒光信號較弱；還觀察到EGFR-IRDye800CW在HCC827細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中有大量的定位。如Figure 3d所示，HCC827細(xì)胞的相對熒光強(qiáng)度達(dá)到130.3，是NCI-H520細(xì)胞(42.1)的3.1倍。同樣，兩種細(xì)胞系之間有顯著差異(P < 0.001)。為了進(jìn)一步研究HCC827細(xì)胞對探針的吸收，本文在另外兩組HCC827細(xì)胞中進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)——阻斷組和同型對照組。對于阻斷組，采用過量游離西妥昔單抗預(yù)處理HCC827細(xì)胞以阻斷EGFR。結(jié)果表明，抗體對受體的阻斷降低了EGFR-IRDye800CW探針的吸收，在HCC827細(xì)胞中只觀察到非常少的熒光(相對熒光強(qiáng)度為66.4，遠(yuǎn)低于EGFR-IRDye800CW組)。同型對照組用IRDye800CW標(biāo)記的人抗IgG重組抗體單鏈抗體片段孵育HCC827細(xì)胞;在HCC827細(xì)胞中未觀察到該同型對照探針的明顯攝取，相對熒光強(qiáng)度為53.5。這些結(jié)果證實(shí)了EGFR-IRDye800CW探針在體外有效靶向EGFR。

Figure 3

作者接著進(jìn)行了探針在肺癌PDX模型的新鮮組織的體內(nèi)腫瘤選擇性和體外成像研究。體內(nèi)熒光成像顯示EGFR-IRDye800CW探針在腫瘤區(qū)域大量積累。熒光信號在探針注射后8 h達(dá)到峰值，腫瘤與正常組織信號比(TNR)達(dá)到5.25。作為對照，在注射EGFR-IRDye800CW探針24 h前給阻斷組荷瘤小鼠注射過量的西妥昔單抗。該組的體內(nèi)成像顯示腫瘤區(qū)域熒光信號明顯減弱，TNR變小(阻斷組TNR zui大值為1.5)。其同型對照組的TNR為1.1。以上數(shù)據(jù)證實(shí)了EGFR-IRDye800CW在HCC827腫瘤中的攝取增強(qiáng)，以及EGFR-IRDye800CW探針在體內(nèi)對腫瘤細(xì)胞的靶向能力。器官和腫瘤的體外熒光成像顯示，探針主要集中在肝臟、腫瘤組織和脾臟。免疫組化染色顯示HCC827腫瘤細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中EGFR呈強(qiáng)陽性。這些結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了EGFR-IRDye800CW在高表達(dá)EGFR的腫瘤中攝取增強(qiáng)。隨后，作者構(gòu)建了肺癌的PDX模型，手術(shù)切除腫瘤、肺和瘤周組織，利用上述組織，進(jìn)行了EGFR靶向探針的孵育成像實(shí)驗(yàn)。如Figure 4a所示，腫瘤內(nèi)NIR-II熒光信號增強(qiáng)，而肺和瘤周組織NIR-II熒光信號明顯較弱。免疫組化染色顯示腫瘤中EGFR呈強(qiáng)陽性(Figure 4b)。如Figure 4c所示，EGFR-IRDye800CW組腫瘤的相對熒光強(qiáng)度達(dá)到126.6，比肺(82.7)高1.5倍，比瘤周組織高1.8倍。同型對照組腫瘤熒光強(qiáng)度甚至低于肺或瘤周組織組。如Figure 4d所示，EGFR-IRDye800CW組腫瘤:肺和腫瘤:瘤周組織的信噪比(SBR)在1.5 ~ 2.1之間。這些結(jié)果證實(shí)了EGFR-IRDye800CW能夠特異性地標(biāo)記腫瘤區(qū)域。

Figure 4

作者隨之進(jìn)行人肺癌樣本的體外成像研究。目的是開發(fā)一種技術(shù)，該技術(shù)通過在手術(shù)過程中提供病例驗(yàn)證結(jié)果(量化邊界距離和疑似轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的鑒別診斷等)來幫助醫(yī)學(xué)專業(yè)人員進(jìn)行病理診斷，且不會干擾組織的完整性或形態(tài)。臨床標(biāo)本為10例根zhi肺癌患者手術(shù)切除的10個肺組織和60個淋巴結(jié)，組織病理學(xué)分析顯示，所有腫瘤均為浸潤性腺瘤。染色方案見Scheme 1。切除后，立即將含有可疑腫瘤組織的標(biāo)本放入含有5%胎牛血清的Krebs-Henseleit 's溶液中，溫度為4-8 ℃，然后轉(zhuǎn)移到含有1 mg /mL EGFR-IRDye800CW探針的磷酸鹽緩沖鹽水溶液中，孵育20 min。孵育結(jié)束后，用含30% PEG-400的磷酸鹽緩沖生理鹽水沖洗3次，每次沖洗1 min。隨即用NIR-II熒光成像系統(tǒng)對標(biāo)本成像，觀察熒光強(qiáng)度。作者通過H&E染色和免疫組化結(jié)果，驗(yàn)證了該方法應(yīng)用于人肺癌切除組織鑒別的可行性。此外，該技術(shù)還用于驗(yàn)證肺癌患者術(shù)中可疑轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)。證明該技術(shù)是一種快速的術(shù)中病理檢測方法，具有臨床應(yīng)用價值。

Scheme 1

首先是人原發(fā)性腫瘤的體外成像研究。手術(shù)切除后，新鮮組織立即按照Scheme 1中步驟孵育并成像。Figure 5顯示了一例典型的不確定肺結(jié)節(jié)和包括術(shù)前CT掃描在內(nèi)的多模式成像（Figure 5a）Figure 5b顯示了胸腔鏡下腫瘤區(qū)域的白光圖像。手術(shù)切除后，切開新鮮組織，暴露腫瘤區(qū)域(Figure 5c-d)，用EGFRIRDye800CW孵育并成像。觀察到組織的部分區(qū)域熒光信號增強(qiáng)，而鄰近組織的熒光信號較弱(Figure 5d)。作者使用標(biāo)準(zhǔn)的H&E染色程序確認(rèn)這些高亮區(qū)域?yàn)槟[瘤組織，并通過免疫組化方法確定EGFR在腫瘤區(qū)域高表達(dá)。如Figure 5e所示，在熒光圖像上進(jìn)行線分析取樣，得到其信號強(qiáng)度；線的信號強(qiáng)度顯示出較好的對比，可以勾畫出腫瘤。EGFR-IRDye800CW組腫瘤TNR為2.5±1.3。而用IRDye800CW標(biāo)記的人抗IgG重組抗體scFv片段孵育的同型對照組，其跨界信號強(qiáng)度幾乎沒有變化。這與之前在動物模型中得到的結(jié)果一致，表明EGFR-IRDye800CW可以通過靶向EGFR特異性標(biāo)記腫瘤細(xì)胞。更重要的是，由于腫瘤與正常組織的信號比*，可以清楚地識別腫瘤邊緣。這些結(jié)果表明EGFR-IRDye800CW探針可以快速標(biāo)記和成像肺癌。然后作者評估了此方法是否可以量化邊緣距離。使用ImageJ軟件對體外熒光圖像進(jìn)行分析，通過先標(biāo)定1厘米像素的距離，然后測量從熒光信號邊緣到短纖維線的距離，量化邊緣距離，與術(shù)后幾天的腔內(nèi)組織病理學(xué)分析報(bào)告的邊緣進(jìn)行比較，二者的邊緣幾乎一致。

此外，作者還通過組織切片的顯微分析驗(yàn)證了本文提出的技術(shù)的特異性。將肺癌患者腫瘤組織的連續(xù)冷凍切片，用EGFR-IRDye800CW培養(yǎng)后，在NIR-II熒光顯微鏡下觀察。腫瘤細(xì)胞區(qū)域有明亮的熒光信號，通過熒光信號可以區(qū)分腫瘤邊緣。更重要的是，EGFR免疫組化證實(shí)了熒光信號與EGFR的表達(dá)一致。以上結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了利用熒光標(biāo)記的抗人EGFR重組抗體scFv片段進(jìn)行肺癌靶向成像的可行性。術(shù)中使用EGFR-IRDye800CW孵育分離組織時，熒光成像可以清晰地將腫瘤與正常肺組織區(qū)分開來。在腫瘤組織中觀察到熒光信號與EGFR表達(dá)的共定位，進(jìn)一步證明EGFR-IRDye800CW能夠特異性靶向和標(biāo)記腫瘤細(xì)胞。

Figure 5

作者接著對人肺癌樣本進(jìn)行淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的體外成像研究。術(shù)前CT掃描顯示可能有淋巴轉(zhuǎn)移(Figure 6a)，但PET/CT未能檢測到病灶內(nèi)高攝取信號。Figure 6b顯示手術(shù)切除淋巴結(jié)的體外成像。作者用手術(shù)刀片暴露淋巴結(jié)內(nèi)部后，立即按照Scheme 1的流程對新鮮淋巴結(jié)標(biāo)本進(jìn)行孵育成像，并分析成像結(jié)果。熒光成像結(jié)果如Figure 6c所示。與孤立的良性淋巴結(jié)相比，轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的熒光信號增加3倍。采用標(biāo)準(zhǔn)的H&E染色程序來確定高熒光區(qū)域，結(jié)果顯示這些高亮區(qū)域包含腫瘤細(xì)胞，并通過EGFR免疫組化，確定這些高亮區(qū)域表達(dá)了高水平的EGFR。如Figure 6d所示，在熒光圖像上繪制興趣線，得到信號強(qiáng)度；橫線信號強(qiáng)度的明顯對比顯示出淋巴轉(zhuǎn)移灶。EGFR-IRDye800CW組TNR為2.7±1.1。此外，作者對基于EGFR-IRDye800CW的近紅外熒光成像的平均熒光強(qiáng)度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的敏感性為77.8%，特異性為92.1%。

Figure 6

討論：肺癌是世上zui常見的癌癥之一，每年造成大量的死亡。近年來，在圖像引導(dǎo)的肺癌手術(shù)切除中，熒光成像技術(shù)得到發(fā)展。但受成像探針和成像系統(tǒng)發(fā)展的限制，該技術(shù)在臨床應(yīng)用中仍面臨諸多困難。

本研究證實(shí)了利用熒光標(biāo)記的抗人EGFR重組抗體scFv片段進(jìn)行肺癌體外快速術(shù)中熒光成像的可行性。用EGFR-IRDye800CW孵育離體肺癌組織時，熒光顯像可清晰區(qū)分腫瘤與正常肺實(shí)質(zhì)。EGFR-IRDye800CW在表達(dá)EGFR的腫瘤組織中的特殊定位使腫瘤可見。組織病理學(xué)證實(shí)熒光信號和EGFR表達(dá)在腫瘤組織中共同定位。這些結(jié)果表明，在手術(shù)中使用熒光標(biāo)記的抗人EGFR重組抗體scFv片段培養(yǎng)分離組織，對腫瘤邊界成像和轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)成像是可行的。期望在手術(shù)中對腫瘤邊界和切除邊緣距離給出醫(yī)學(xué)專業(yè)意見，如術(shù)中冰凍切片可以做到的那樣。

在本研究中，作者用EGFR靶向的熒光探針培養(yǎng)新鮮切除的肺組織，并使用NIR-II熒光成像系統(tǒng)可視化腫瘤的位置和邊界。將6例患者新鮮切除的肺組織進(jìn)行體外EGFRIRDye800CW培養(yǎng)，然后用NIR-I/II熒光成像系統(tǒng)成像，分別計(jì)算TNR。結(jié)果顯示，NIR-II成像的平均TNR為3.13±0.48(范圍2.43 ~ 3.87)，NIR-I成像的平均TNR為2.24±0.29(范圍1.87 ~ 2.63)，NIR-II成像結(jié)果的TNR顯著高于NIR-I成像結(jié)果(P < 0.01)。導(dǎo)致NIR-II熒光成像中TNR較高的主要因素是正常肺組織中熒光強(qiáng)度的降低。

在本研究中，EGFR靶向探針主要用于嚙齒動物標(biāo)本和人肺癌樣本的體外成像研究，而非體內(nèi)成像；由于探針不是靜脈注射或在體內(nèi)局部給藥，也就不需要探針的安全性或毒性數(shù)據(jù)，這為探針的臨床快速轉(zhuǎn)譯奠定了基礎(chǔ)。

術(shù)中病理診斷對術(shù)中決策至關(guān)重要。通常情況下，術(shù)中腫瘤的定位取決于醫(yī)務(wù)人員的經(jīng)驗(yàn);往往只能得到相對粗糙的腫瘤邊界。即使擴(kuò)大切除范圍，仍有一些腫瘤可能被遺漏。陽性切緣和微轉(zhuǎn)移的存在導(dǎo)致8 - 50%的患者腫瘤在術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。因此，在術(shù)中確定腫瘤邊界和發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移對實(shí)現(xiàn)精確的手術(shù)切除非常重要。其他技術(shù)，如術(shù)中超聲技術(shù)，腫瘤檢測特異性非常高，但其敏感性不足以導(dǎo)致小病變漏診，且對手術(shù)切緣的判斷不足；術(shù)中MRI (iMRI)可以顯著提高神經(jīng)外科的準(zhǔn)確性和安全性，但由于設(shè)備復(fù)雜，使用成本高，需要在手術(shù)室進(jìn)行特殊改造等，目前還不能推廣。

近年來發(fā)展了一些新的術(shù)中成像技術(shù)，如用于腫瘤惡性程度判斷的術(shù)中拉曼成像和腫瘤邊界成像，有報(bào)道指出拉曼成像可用于術(shù)中快速病理檢測，展示出一定的應(yīng)用潛力，但由于拉曼成像本身信號較弱，其靈敏度有待重新評估。

綜上所述，本研究中，作者采用靶向近紅外熒光探針在術(shù)中培養(yǎng)分離的組織標(biāo)本，然后使用NIR-II熒光成像系統(tǒng)快速識別切除肺組織中的腫瘤區(qū)域，區(qū)分腫瘤邊界，以及在淋巴結(jié)內(nèi)的轉(zhuǎn)移。值得注意的是，提出的術(shù)中快速病理檢測技術(shù)可以應(yīng)用于其他需要局部廣泛切除的領(lǐng)域(如黑色素瘤、結(jié)腸癌、外陰癌)，以解決邊緣控制差的問題。

局限性：首先，盡管該研究包括了肺癌位點(diǎn)的幾個腫瘤亞位點(diǎn)，并且每個樣本使用了許多數(shù)據(jù)點(diǎn)，但樣本量限制了可以得出的結(jié)論。其次，由于碳粉沉積在肺組織表面會干擾熒光成像，該技術(shù)在吸煙者或嚴(yán)重污染地區(qū)的應(yīng)用可能受到限制。再者，雖然本文通過免疫組化證實(shí)了EGFR在腫瘤細(xì)胞和正常肺組織中的表達(dá)存在顯著差異，也證實(shí)了超過80%的肺癌患者中EGFR過表達(dá)。同時利用該技術(shù)，證明了EFGR的表達(dá)與熒光強(qiáng)度呈正相關(guān)，那么在EGFR低表達(dá)的患者中，該技術(shù)可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。最后，已知腫瘤中EGFR分布不均，腫瘤中EGFR表達(dá)的顯著不均一性可能會影響腫瘤與正常組織的比值。盡管存在異質(zhì)性和樣本量小的問題，但研究結(jié)果表明，本文開發(fā)的方法可以用于腫瘤邊界的識別。

總結(jié)：熒光標(biāo)記抗體結(jié)合術(shù)中熒光成像可成功識別肺癌標(biāo)本的邊界，和用于體外轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)檢測。這項(xiàng)技術(shù)有助于在有限的手術(shù)時間內(nèi)做出腫瘤合理切除的決定。

參考文獻(xiàn)

doi.org/10.1007/s00259-022-05975-7

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近紅外二區(qū)小動物活體熒光成像系統(tǒng) - MARS 

NIR-II in vivo imaging system

高靈敏度 - 采用Princeton Instruments深制冷相機(jī)，活體穿透深度高于15mm

高分辨率 - 定制高分辨大光圈紅外鏡頭，空間分辨率優(yōu)于3um

熒光壽命 - 分辨率優(yōu)于 5us

高速采集 - 速度優(yōu)于1000fps （幀每秒）

多模態(tài)系統(tǒng) - 可擴(kuò)展X射線輻照、熒光壽命、一區(qū)熒光成像、原位成像光譜，CT等

顯微鏡 - 近紅外二區(qū)高分辨顯微系統(tǒng)，兼容成像型光譜儀

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 恒光智影

          上海恒光智影醫(yī)療科技有限公司，專注于近紅外二區(qū)成像技術(shù)。致力于為生物醫(yī)學(xué)、臨床前和臨床應(yīng)用等相關(guān)領(lǐng)域的研究提供*的、一體化的成像解決方案。自主研發(fā)近紅外二區(qū)小動物活體熒光成像系統(tǒng)-MARS。

          與基于可見光波長的傳統(tǒng)成像技術(shù)相比，我們的技術(shù)側(cè)重于X射線、紫外、紅外、短波紅外、太赫茲范圍，可為腫瘤學(xué)、神經(jīng)學(xué)、心血管、藥代動力學(xué)等一系列學(xué)科的科研人員提供清晰的成像效果，助力科技研發(fā)。

          同時，恒光智影還具備探針研發(fā)能力，我們已經(jīng)成功研發(fā)了超過15種探針，這些探針將廣泛地應(yīng)用于眾多生物科技前沿領(lǐng)域的相關(guān)研究中。