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第一天:

1.在培養板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min;

2.用4%的多聚甲醛固定爬片15min ，PBS浸洗玻片3次，每次3min，

3.0.5%Triton X-100室溫通透20min。

4.PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水紙吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室溫封閉30min ;

5.吸水紙吸掉封閉液，不洗，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗并放入濕盒，4℃孵育過夜，

第二天:

6.加熒光二抗: PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗，濕盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min;注意:從加熒光二抗起，后面所有操作步驟都盡量在較暗處進行。

7.復染核:滴加DAPI避光孵育5min，對標本進行染核，PBST 5minx4次洗去多余的DAPI;

8.用吸水紙吸干爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，然后在熒光顯微鏡下觀察采集圖像。