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ALT生化檢測實驗服務原理:
丙氨酸氨基轉移酶(ALT),又稱谷丙轉氨酶(GPT),在37C、 pH7. 4的條件下,可催化基質(底物)液中的丙氨酸與a-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸:生成的丙酮酸可與起終止和顯色作用的2, 4二硝基苯肼發生加成反
應,生成丙酮酸-2, 4-二硝基苯腙,進而在堿性環境中生成紅棕色的苯腙硝醌化合物,其顏色的深淺在一定范圍內與丙酮酸的生成量,亦即與ALT活性的高低成正比關系。據此與同樣處理的丙酮酸標準液相比較,便可算出或通過標準曲線查出血清中ALT的活性.
ALT生化檢測實驗服務注意事項:
1、比色法中常用的有賴氏(Rei tman-Franke1)法及金氏(King)法。賴氏法標準曲線所定單位數,是用實驗方法和卡門氏分光光度法(速率法)作對比測定求得的。以卡門氏單位報告結果,比較準確。卡門氏單位定義為: 1ml血清,反應液總容量3ml,波長340nm,1cm光徑,25"C, 1min內 所生成的丙酮酸,使NADH氧化成NAD* 而引起吸光度每下降0. 001為一個單位(1卡門氏單位=0.482 IU/L,25C)。
2、一般血清標本內源性丙酮酸很少,個體相差也不大,作大批標本測定時,不需每份標本都作對照管,嚴重脂血、黃疽、溶血及陳舊血清須作自身對照管。建議對活力單位超過正常尤其是在臨界時,進行復測:復測時每份標本均作對照管。
3、酶活力超過150單位時,用鹽水稀釋血清后重測。
4、應將一般血清的對照管(或稱標本空白管)的吸光度作為日常質控的指標之一;如相差大,可考慮a-酮戊二酸濃度、DNPH濃度及儀器等原因引起。
5、血清中ALT在室溫(25"C) 可保存2天,在4C可保存-周,在-25"C可保存1個月。
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