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銀染法是一種用于檢測蛋白質或核酸的生物化學技術,其基本原理涉及銀離子的化學反應。以下是銀染法原理的詳細介紹:
· 銀染法中,銀離子與DNA或蛋白質結合。
· 在堿性pH環(huán)境下,還原劑如甲醛將銀離子還原成金屬銀,這些銀顆粒沉淀在蛋白質或DNA的表面上,從而顯色。
· 由于銀染具有很高的靈敏度,它能夠檢測到凝膠上低于1ng/蛋白質點的物質,因此廣泛應用于2D凝膠分析和極低蛋白含量的測定中。
此外,銀染中的蛋白質吸光度與濃度之間的關系可用于研究蛋白質的某些特殊基團,如含硫氨基酸在銀染中的作用表明,不含或只含少量gas殘基的蛋白質有時會呈現負染。
銀染法實驗步驟如下:
1. 固定:將凝膠放入約100ml固定液中,室溫搖動20分鐘或40分鐘以上甚至過夜。
2. 洗滌:棄去固定液,加入100ml 30%乙醇或100ml 10%甲醇,室溫搖動10分鐘。
3. 增敏:加入100ml銀染增敏液(1X)或100ml銀溶液(1X),室溫搖動2分鐘。
4. 洗滌:棄去增敏液,加入200ml MilliQ級純水或雙蒸水,室溫搖動10分鐘。
5. 顯色:加入100ml銀溶液(1X)或顯色液,室溫搖動10分鐘。
6. 洗滌:棄去顯色液,加入200ml MilliQ級純水或雙蒸水,室溫搖動1-1.5分鐘。
7. 顯影:根據顯色結果,使用顯影液進行顯影,直至看到目的蛋白帶
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