腎小管間質(zhì)纖維化模型構(gòu)建方法

體重為250～300g的成年大鼠，經(jīng)腹腔注射5％水he氯醛麻醉，麻醉后取仰臥位固定于手術(shù)板上。動(dòng)物腹部手術(shù)區(qū)常規(guī)消毒及去毛，沿腹中線作手術(shù)切口，依次切開(kāi)皮膚和肌肉，游離腎臟和輸尿管，用組織qian托起左側(cè)輸尿管中段部位，止xue鉗夾住，在兩端用4-0號(hào)絲線分兩次結(jié)扎左側(cè)輸尿管近腎盂段，剪斷輸尿管，然后常規(guī)縫合肌肉和皮膚。術(shù)后動(dòng)物常規(guī)單籠飼養(yǎng)觀察，自由飲水及進(jìn)食。于術(shù)后第7, 14, 21, 28日動(dòng)物麻醉后右股動(dòng)脈放血處死，分離血清作生化測(cè)定；處死前1d在禁食不禁水的條件下，收集大鼠24h尿液測(cè)尿量。取左腎組織標(biāo)本經(jīng)固定液固定后，作常規(guī)組織切片，光鏡下觀察。腎小管間質(zhì)病變由3個(gè)參數(shù)判定：蛋白管型和腎小管的擴(kuò)張；間質(zhì)炎細(xì)胞的浸潤(rùn)；間質(zhì)纖維化的程度。每個(gè)參數(shù)按0～3分評(píng)定：0分：正常；1分：輕度受損；2分：中度受損；3分：重度受損。

腎小管間質(zhì)纖維化模型構(gòu)建特點(diǎn)

模型大鼠手術(shù)后，短期內(nèi)(術(shù)后7～14d)動(dòng)物可出現(xiàn)血清尿素氮、肌酐測(cè)定值明顯升高；術(shù)后21～28d，血清中尿素氮、肌酐反而下降，但28d時(shí)動(dòng)物血清肌酐值仍高于手術(shù)前。表明單側(cè)輸尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction, UUO)后腎功能有一個(gè)急性失代償?shù)街饾u通過(guò)對(duì)側(cè)腎臟代償，最后對(duì)側(cè)腎臟亦失代償?shù)淖兓^(guò)程，此變化與輸尿管梗阻后引起機(jī)體腎內(nèi)壓、腎臟血流動(dòng)力學(xué)和腎小球?yàn)V過(guò)壓改變有關(guān)。術(shù)后28d內(nèi)，24h尿蛋白排泄量無(wú)明顯增加。鏡下病理組織學(xué)觀察結(jié)果顯示，術(shù)后3d時(shí)，腎組織內(nèi)已出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、細(xì)胞增殖、小管擴(kuò)張等病理變化，此后動(dòng)物可發(fā)生進(jìn)行性腎小管wei縮及間質(zhì)纖維化，但腎小球組織結(jié)構(gòu)無(wú)明顯病理?yè)p傷；PAS染色可見(jiàn)腎組織內(nèi)彌漫性腎小管基底膜增厚皺縮，馬森(Masson)染色可見(jiàn)腎皮質(zhì)區(qū)、皮髓交界處發(fā)生明顯纖維化。模型制作方法簡(jiǎn)便，制作時(shí)間短，重復(fù)性較好，腎間質(zhì)纖維化發(fā)展迅速，可觀察到腎臟細(xì)胞轉(zhuǎn)分化過(guò)程。