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實驗過程
(1)標準品的稀釋與加樣:標準品按照說明書稀釋好五個梯度,各個梯度每孔加樣量都為50uL ;
(2)加樣:分別設空白孔、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40uL,然后再加待測樣品10uL。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻;
(3)溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30min;
(4)配液洗滌:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用;小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30sec后棄去,如此重復5次,拍干;
(5)加酶:每孔加入酶標試劑50uL,空白孔除外;
(6)溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30min ;
(7)洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30sec后棄去,如此重復5次,拍干;
(8)顯色:每孔先加入顯色劑A50uL,再加入顯色劑B50uL,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15min;
(9)終止:每孔加終止液50uL,終止反應;
(10)測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15min以內進行。
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