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上海萊睿科學(xué)儀器有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 安捷倫液相色譜儀,氣相色譜儀,尼高力紅外光譜儀,IKA磁力攪拌器,TOMY高壓滅菌鍋 |
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2017-5-2 閱讀(1490)
1儀器與材料
液相色譜儀，含SPD—M20A二極管陣列檢測(cè)器，CBM—20A系統(tǒng)控制器，CTO—20A柱溫箱；梅特勒EL—204十萬(wàn)分之一分析天平；自動(dòng)雙重蒸餾水蒸餾器；數(shù)控超聲儀；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；C—605中壓制備色譜儀。
蘆丁、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷、江戶櫻花苷、槲皮素、山柰酚對(duì)照品均由本實(shí)驗(yàn)室分離得到，經(jīng)MS、1H-NMR和13C-NMR確定結(jié)構(gòu)，HPLC峰面積歸一化法分析質(zhì)量分?jǐn)?shù)均達(dá)到98%以上。珍珠菜藥材（批號(hào)分別為200801、200802、200803。乙腈為色譜純，水為二次蒸餾水，其余試劑為分析純；色譜硅膠。
2方法與結(jié)果
2.1珍珠菜提取物的制備
取珍珠菜干燥藥材，用10倍量80%乙醇提取3次，合并提取液，加水沉淀除去弱極性物質(zhì)，上清液濃縮至無(wú)醇味，濾過(guò)，濾液上AB-8大孔樹(shù)脂，上樣后先用水洗脫至無(wú)色，再依次用40%、95%乙醇洗脫，將40%乙醇洗脫部位濃縮、冷凍干燥成粉末，即得珍珠菜提取物。
2.2色譜條件
色譜柱為Chromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5.0 μm）；流動(dòng)相為乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫：0～20 min，13%～35% A；20～30 min，35%～100% A；體積流量1.0 mL/min；雙波長(zhǎng)檢測(cè)λ1＝283 nm（江戶櫻花苷），λ2＝370 nm（蘆丁、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷、槲皮素、山柰酚）；柱溫35 °C。色譜圖見(jiàn)圖1。
2.3對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備
精密稱取各對(duì)照品適量，用甲醇溶解并定容，分別得到含蘆丁381.0 μg/mL、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷166.0 μg/mL、江戶櫻花苷387.0 μg/mL、槲皮素55.2 μg/mL、山柰酚25.2 μg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。
2.4供試品溶液的制備
精密稱取珍珠菜提取物樣品25.0 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，過(guò)0.45 μm膜，即得供試品溶液。
2.5線性關(guān)系考察
分別精密量取蘆丁、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷、江戶櫻花苷和山柰酚對(duì)照品儲(chǔ)備液各15.0、12.0、9.0、6.0、3.0 mL及槲皮素對(duì)照品儲(chǔ)備液10.0、8.0、6.0、4.0、2.0 mL，分別置100 mL量瓶中，甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，配制成一系列質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，精密吸取各混合對(duì)照品溶液20 μL，分別注入液相色譜儀，測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程（表1），各對(duì)照品與峰面積線性關(guān)系良好。
2.6檢測(cè)限
取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液，定量稀釋成不同質(zhì)量濃度對(duì)照品溶液后，直接進(jìn)樣，直到某一進(jìn)樣量出峰峰高為儀器噪音的3倍時(shí)，即為該對(duì)照品的檢測(cè)限，結(jié)果見(jiàn)表1。
2.7精密度試驗(yàn)
吸取上述5種混合對(duì)照品溶液20 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算峰面積的RSD，即為日內(nèi)精密度；連續(xù)檢測(cè)3 d，每天檢測(cè)2次，計(jì)算峰面積的RSD，即為日間精密度，結(jié)果見(jiàn)表1。
2.10回收率試驗(yàn)
精密稱取9份批號(hào)為200801的珍珠菜提取物樣品，每份約4.0 mg，分別置5.0 mL量瓶中，平均分成3組，按照樣品中每種待測(cè)成分量的80%、100%、120%定量加入5種對(duì)照品，甲醇定容，分別取20 μL進(jìn)樣分析，外標(biāo)法計(jì)算各成分平均回收率。結(jié)果蘆丁、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷、江戶櫻花苷、槲皮素、山柰酚的平均回收率分別為97.8%、98.9%、102.4%、98.4%、92.2%，RSD分別為2.70%、1.71%、1.16%、0.50%、3.81%。
2.11樣品測(cè)定
取3個(gè)批次的珍珠菜提取物樣品，制備供試品溶液，分別進(jìn)樣20 μL，測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2。
3討論
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明不同批次珍珠菜提取物樣品間所測(cè)化學(xué)成分的量相差不大。黃酮類化合物既是珍珠菜提取物中的主要成分，又是主要的抗腫瘤活性成分，通過(guò)測(cè)定發(fā)現(xiàn)蘆丁、江戶櫻花苷等黃酮苷的量較高，而槲皮素、山柰酚等苷元的量較低，故可用蘆丁、江戶櫻花苷為指標(biāo)來(lái)控制提取物中黃酮類和二氫黃酮類的量。本方法操作簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，靈敏度高，可用于珍珠菜提取物中黃酮類化合物的質(zhì)量控制。
