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上海萊睿科學儀器有限公司
主營產品： 安捷倫液相色譜儀,氣相色譜儀,尼高力紅外光譜儀,IKA磁力攪拌器,TOMY高壓滅菌鍋 |
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2017-4-27 閱讀(1898)
儀器與材料
液相色譜儀，含SPD—M20A二極管陣列檢測器，CBM—20A系統控制器，CTO—20A柱溫箱；梅特勒EL—204十萬分之一分析天平；自動雙重蒸餾水蒸餾器；數控超聲儀；旋轉蒸發儀；C—605中壓制備色譜儀。
蘆丁、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷、江戶櫻花苷、槲皮素、山柰酚對照品均由本實驗室分離得到，經MS、1H-NMR和13C-NMR確定結構，HPLC峰面積歸一化法分析質量分數均達到98%以上。珍珠菜藥材（批號分別為200801、200802、200803。乙腈為色譜純，水為二次蒸餾水，其余試劑為分析純；色譜硅膠。
2方法與結果
2.1珍珠菜提取物的制備
取珍珠菜干燥藥材，用10倍量80%乙醇提取3次，合并提取液，加水沉淀除去弱極性物質，上清液濃縮至無醇味，濾過，濾液上AB-8大孔樹脂，上樣后先用水洗脫至無色，再依次用40%、95%乙醇洗脫，將40%乙醇洗脫部位濃縮、冷凍干燥成粉末，即得珍珠菜提取物。
2.2色譜條件
色譜柱為Chromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5.0 μm）；流動相為乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫：0～20 min，13%～35% A；20～30 min，35%～100% A；體積流量1.0 mL/min；雙波長檢測λ1＝283 nm（江戶櫻花苷），λ2＝370 nm（蘆丁、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷、槲皮素、山柰酚）；柱溫35 °C。色譜圖見圖1。
2.3對照品儲備液的制備
精密稱取各對照品適量，用甲醇溶解并定容，分別得到含蘆丁381.0 μg/mL、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷166.0 μg/mL、江戶櫻花苷387.0 μg/mL、槲皮素55.2 μg/mL、山柰酚25.2 μg/mL的對照品儲備液。
2.4供試品溶液的制備
精密稱取珍珠菜提取物樣品25.0 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，過0.45 μm膜，即得供試品溶液。
2.5線性關系考察
分別精密量取蘆丁、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷、江戶櫻花苷和山柰酚對照品儲備液各15.0、12.0、9.0、6.0、3.0 mL及槲皮素對照品儲備液10.0、8.0、6.0、4.0、2.0 mL，分別置100 mL量瓶中，甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，配制成一系列質量濃度的混合對照品溶液，精密吸取各混合對照品溶液20 μL，分別注入液相色譜儀，測定，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程（表1），各對照品與峰面積線性關系良好。
2.6檢測限
取上述對照品儲備液，定量稀釋成不同質量濃度對照品溶液后，直接進樣，直到某一進樣量出峰峰高為儀器噪音的3倍時，即為該對照品的檢測限，結果見表1。
2.7精密度試驗
吸取上述5種混合對照品溶液20 μL，重復進樣6次，計算峰面積的RSD，即為日內精密度；連續檢測3 d，每天檢測2次，計算峰面積的RSD，即為日間精密度，結果見表1。
2.10回收率試驗
精密稱取9份批號為200801的珍珠菜提取物樣品，每份約4.0 mg，分別置5.0 mL量瓶中，平均分成3組，按照樣品中每種待測成分量的80%、100%、120%定量加入5種對照品，甲醇定容，分別取20 μL進樣分析，外標法計算各成分平均回收率。結果蘆丁、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷、江戶櫻花苷、槲皮素、山柰酚的平均回收率分別為97.8%、98.9%、102.4%、98.4%、92.2%，RSD分別為2.70%、1.71%、1.16%、0.50%、3.81%。
2.11樣品測定
取3個批次的珍珠菜提取物樣品，制備供試品溶液，分別進樣20 μL，測定，外標法計算，結果見表2。
3討論
實驗結果表明不同批次珍珠菜提取物樣品間所測化學成分的量相差不大。黃酮類化合物既是珍珠菜提取物中的主要成分，又是主要的抗腫瘤活性成分，通過測定發現蘆丁、江戶櫻花苷等黃酮苷的量較高，而槲皮素、山柰酚等苷元的量較低，故可用蘆丁、江戶櫻花苷為指標來控制提取物中黃酮類和二氫黃酮類的量。本方法操作簡便快捷，結果準確可靠，重復性好，靈敏度高，可用于珍珠菜提取物中黃酮類化合物的質量控制。
