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上海萊睿科學儀器有限公司
主營產品： 安捷倫液相色譜儀,氣相色譜儀,尼高力紅外光譜儀,IKA磁力攪拌器,TOMY高壓滅菌鍋 |
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2017-4-27 閱讀(1593)
本實驗采用液相色譜測定桑白皮中綠 原 酸 的 含 量，旨在為桑白皮的質量控制提供方法，為今后進一步的開發與研究提供科學依據。
1儀器和試藥
Agilent1100高 效 液 相 色 譜 儀(美 國 安 捷 倫 公司) ;KQ-200VDB型超聲波清洗器;LG16-WA型臺式 高 速 離 心 機;SH2-D循環水式真空泵;綠 原 酸 對 照 品，甲 醇 為 色 譜 純(FisherScientific公 司) ，水為高純水，其余試 劑 為 分 析 純，桑 白 皮 飲 片(批 號20090907，20100525，20100128，20101026，20100705)。
2方法與結果
2.1色 譜 條 件
DiamonsilC18色 譜 柱(4.6mm×250mm，5μm) ;流動相乙腈-0.4%磷 酸(11∶89) ;檢測波長327nm;柱 溫30°C;流 速1mL·min－1;進 樣量10μL。見圖1。
2供試品溶液提取方法優化
2.2.1星點設計試驗
根據 預 試 驗 結 果，采 用 星 點設計法對桑白皮供試品溶液的甲醇超聲提取方法進行優化，以綠 原 酸 的 含 量 為 評 價 指 標，選 擇 甲 醇 體 積分數、超聲時 間、溶 媒 比3個 因 素。星點 設 計 實 驗 因素按矩陣選擇的各水平及其對應的編碼值見表1～2。
2.2.2模型 擬 合
以 綠 原 酸 含 量 為 因 變 量，對 實 驗結果 進 行 二 項 式 擬 合，以 方 程 各 項 系 數P＜0.05作為顯著標準，對方程進行優化，得二項式方程:Y=0.32762+0.015799X1+0.020272X3－0.03351X12－0.01597X22－0.03008X23+0.01489X1X2+0.021596X2X3(r=0.8901)
2.2.3提取條 件 優 化 和 驗 證
根據二項式方程繪制 響 應 曲 面 圖，結 果 見 圖2。對 二 項 式 方 程 進 行 求導，可 得:當提 取 條 件 為60.7%甲 醇、提 取 時 間 為45.5min，溶 媒 比 為11.6倍 時，Y有 預 測 的 zui 大值0.335。本實驗zui終選取桑白皮的*提取條件為60%甲 醇、提 取 時 間 為15min，溶 媒 比為10倍。取桑白皮飲片粉末約5g，精密稱定，共 取3份，根 據 確定的*提取 條 件 制 備 供 試品 溶 液，按2.1項 下 色譜條件 進 行 測 定。結果綠原酸質量分數平均值為0.365±0.0079mg·g－1。結果表明，本法的提取效果較好。
2.3溶液制備
2.3.1供試品 溶 液 的 制 備
取 藥 材 粉 末5.0g，精密稱 定，加60%甲 醇50mL，稱 重，超 聲45min，放冷，補足 質量，濾 過，取 續 濾 液，用0.45μm濾 膜 濾過，即得。
2.3.2對照品溶液的制備
取綠原酸對照品適量，精密稱定，加60%甲醇制成每1mL含 綠 原 酸45μg對照品溶液，用0.45μm濾膜濾過，即得。
2.4線性關系 的 考 察
分 別 精 密 吸 取 對 照 品 溶 液1，2，4，6，8，10μL，注入液相色譜儀，按 上 述 色 譜 條件進行測定，以峰面積積分值Y為縱坐標，對 照 品 量X(μg)為橫 坐 標，繪制標準曲線得綠原酸的回歸方程Y=2329.0289X+8.1841(r=0.9999)。綠 原酸在0.045～0.45μg，峰 面 積 與 進 樣 量 呈 良好 的 線性關系。
2.5精密度試驗
精密吸取對 照 品 溶 液，重 復 進 樣6次，按2.1項下色 譜 條 件 進 行 分 析，測 定 綠 原 酸峰面積。結果綠原酸峰 面 積RSD0.57%，表 明 該 方 法精密度良好。
2.6穩定 性 試 驗
精 密 吸 取 供 試 品 溶 液，分 別 于0，4，8，12，16，24h進 樣10μL，按2.1項 下 色 譜條件 進 行 分 析，測 定 綠 原 酸 的 峰 面 積。結 果 綠 原 酸 峰面 積RSD1.26%，表 明 供 試品 溶 液 在24h內穩 定。
2.7重復性試驗
取同 一 批 樣 品6份，按2.3.1項下制備供試品溶液，依2.1項下色譜條件進行分析，測定綠原酸的峰面積并計算含量。結果桑白皮中綠原 酸 的 平 均 質 量 分 數 為0.402mg·g－1，RSD2.02%，表明該方法的重復性良好。
2.8加樣回收率試驗
取已測 知 含 量 的 樣 品6份，每份2.5g，精密 稱 定，分別精密加入綠原酸對照品溶液(0.45g·L－1)2mL，按 供 試 品 溶 液 的 制 備 方 法制備，進 樣10μL，記 錄 色 譜 圖，計算加樣回收率，結果見表3。
2.9樣 品 測 定
按2.3.1項 供 試 品 溶 液 的 制 備 方法，2.1項 下 的 色 譜 條 件 對5批 桑 白 皮 飲 片 進行 測定，結果見表4。
3討論
在預試驗中，供試品溶液的制備方法考察了超聲提取和回流 提 取2種 方 法，結果超聲提取含量較高，處理過程較簡便，所以本實驗選 擇 超 聲 提 取 為 供試品溶液的制備方法。
星點設計是多因素五水平的優化方法，先利用二項式非線性回歸進行分析和計算，得到應變量和自變量之間的函數關系，再利用此函數關系來求出*的自變量值。所以，相 對 于 正 交 設計，星 點 設 計-響 應面優化法能更準備地找到所考察因素的*條件，且在zui低 要 求 下，只 是比 正 交 設 計 多6個 實 驗 號。因此，本實驗 采 用 星 點 設 計-響 應 面 優 化 法 對 提 取 條件進行優化，該方法有的統計軟件可以設計實驗矩陣和處理數 據，操 作 方 便，結 果 能 比較 精 確 地 找 到 各考察因素在較佳條件下因變量的zui大值。
