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產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格（元） |
PI (Propidium Iodide) 碘化丙啶 | 40711ES10 | 10mg | 4 ºC避光保存 | 189.00 |
PI (Propidium Iodide) 碘化丙啶 | 40711ES60 | 100mg | 4 ºC避光保存 | 1155.00 |
產品描述
碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一種常用的細胞核熒光染料，作為一種溴化乙錠（EB）的類似物，能夠嵌入堿基之間實現與DNA結合。這種結合沒有或者幾乎無序列傾向性，大約每4-5個DNA堿基對結合一個染料。PI也能與RNA結合，需要用核酸酶處理來區分DNA和RNA染色。水溶液中PI的zui大激發/發射波長是493/636nm。一旦與核酸結合，熒光信號明顯增強20-30倍，zui大激發波長向紅色波段遷移~30-40nm，zui大發射波長向藍色波段遷移~15nm，從而使其zui大激發/發射波長變為535/617nm。PI的摩爾吸光系數相對比較低，但是其具有足夠大的斯托克司頻移來同時檢測核酸DNA和熒光標記抗體，只需要使恰當的濾片。PI適用于熒光顯微鏡，共聚焦顯微鏡，流式細胞儀以及熒光計分析。
PI不能穿透細胞膜而被排斥在活細胞外，但是可以穿過破損的細胞膜而對核染色。利用這一特性，通常與Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活細胞熒光探針一起使用，同時對活細胞和死細胞染色和鑒定，用于細胞凋亡相關的研究。也可以用作多重熒光染色的復染劑，兼容于各種細胞標記技術，包括直接或者間接的熒光抗體檢測，mRNA原位雜交，細胞結構特異性的熒光探針檢測法以及組織染色。PI的單獨染色也可以進行細胞周期的檢測。
產品性質
英文同義名（English synonym） | 2,7-Diamino-9-phenyl-10 (diethylaminopropyl)-phenanthridium iodide methiodide. |
CAS號（CAS NO.） | 25535-16-4 |
分子式（Formula） | C27H34I2N4 |
分子量（Molecular Weight） | 668.4 |
外觀（Appearance） | 暗紅色結晶 |
純度（Purity） | ≥95% by HPLC |
溶解性（Solubility） | 溶于水（1mg/ml） |
熒光光譜 （Fluorescence Spectral） | 水溶液，PI的Ex/Em= 493/636nm；PI-核酸的Ex/Em= 535/617nm；熒光可用氙氣燈，泵弧燈或者488nm氬離子激光激發。通常情況下，用流式細胞儀的FL2通道檢測。 |
結構式（Structure） |
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運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。4 ºC避光保存，至少一年穩定。
使用方法
- 儲存液的配制
稱取1mg PI粉末（M. Wt= 668.4），用1ml去離子水充分溶解后配置成1mg/ml（1.5 mM）的儲存液。4 ºC避光保存，至少6個月穩定。
- 貼壁細胞復染步驟（熒光顯微鏡檢測）
- 樣本準備：根據自身樣本選擇合適的步驟固定細胞。PI染色一般在其它染色完成后再進行。PI復染要求細胞經透化處理。
- RNase酶處理：若樣本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，則需要進行RNase處理。若樣本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；b，將本品置于含有100 µg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20min；c，用2×SSC溶液清洗樣本3次，每次1min。
- 復染：a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；b，直接用2X SSC稀釋1mg/ml（1.5 mM）PI儲存液 1:3000，得到500 nM的PI工作液。通常添加300µL染液足夠用于一個蓋玻片細胞制片。染色1-5min。c，2×SSC清洗幾次，流盡多余的緩沖液后，加入抗淬滅劑封片（比如Yeasen，貨號：36308ES08）。d，選擇熒光顯微鏡的合適濾片進行觀察。
- 懸浮細胞復染步驟（流式細胞儀檢測）
- 樣本準備：根據自身樣本選擇合適的步驟固定細胞。或者使用如下的步驟：
- 收集一定量的細胞，密度約 2 × 105 ~1 × 106。離心收集細胞，吸掉上清液，用手輕彈管壁就剩下
的液體重懸細胞。之后加入1ml常溫存放的PBS；
- 將所有的重懸細胞轉移到4ml于-20ºC預冷的無水乙醇，在高速渦旋混勻的同時一邊用槍緩慢的添
加細胞懸液到乙醇內。于-20ºC乙醇中固定5-15min。
- 離心收集細胞，除去乙醇。用手輕彈管壁以彈松細胞后，加入5ml室溫的PBS。允許細胞水化15min；
- 復染
- 用染色液（100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2 , 0.5 mM MgCl2 , 0.1% Nonidet® P-40）稀
釋1mg/ml（1.5 mM）PI儲存液 1:500，得到3 µM的PI工作液。1ml的PI染色液足夠用于每個細胞樣本的檢測。注：工作液的使用濃度可以根據自身實驗體系調整，也可以直接使用PBS，HBSS等緩沖液直接稀釋PI儲存液到需要的濃度。
- 樣本制備的zui后一步后離心收集細胞，去除上清，用手輕彈管壁以彈松細胞后，加入1ml的PI染
色工作液。室溫孵育15min后，流式細胞儀進行細胞分析。若用流式顯微鏡觀察，則需要離心樣本，去除上清并重懸細胞在新鮮的緩沖液中。吸取1滴懸液到載玻片上，蓋上蓋玻片后觀察。
- 染色質FISH復染步驟
- 樣本準備：根據標準步驟制備樣本。復染之前的zui后一步用去離子水清洗樣本以去除玻片上殘留的緩沖鹽。室溫晾干。此步驟有助于減少非特異性的背景染色。
- 復染
- 工作液的配制：用PBS緩沖液直接稀釋1 mg/ml（1.5 mM）的PI儲存液1:1000，得到1.5 µM的
PI染色工作液。滴加300µL的工作液直接到樣本。有必要的話，工作液內加入新鮮制備的RNase A（終濃度：10 µg/mL）。可使用塑料蓋玻片均勻分布染液在載玻片上。室溫避光條件下孵育樣本30 min；如
果加入RNase則37ºC孵育。
- 去除蓋玻片，用PBS或去離子水清洗以除去沒有結合的染料；
- 用吸水紙巾圍繞著樣本周圍吸取殘留液體，蓋上玻璃蓋玻片后用石蠟或者指甲油封住蓋玻片邊緣。也可用抗熒光淬滅劑進行封片。
- 選擇熒光顯微鏡的合適濾片進行觀察。
注意事項
- 碘化丙啶（PI）是已知的誘變劑，因此PI溶液在丟棄之前需要先經過活性炭處理。
- 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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