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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 125U |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 10107ES62 |
產品介紹
Hieff® Long Taq DNA Polymerase 長片段DNA聚合酶
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Hieff® Long Taq DNA Polymerase 長片段DNA聚合酶 | 10107ES62 | 125 U | 155.00 |
Hieff® Long Taq DNA Polymerase 長片段DNA聚合酶 | 10107ES78 | 5×125 U | 735.00 |
產品描述
Hieff® Long Taq DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase與一種含有3’ →5’外切酶活性的蛋白組成的混合酶，其保真性是Taq DNA Polymerase的6倍，專門用于長片段的擴增。*的緩沖體系使Hieff® Long Taq DNA Polymerase可擴增長達8 kb的人基因組片段和10 kb左右的質粒模板。PCR擴增產物的3’端帶A，可直接用于TA克隆。試劑盒中的PCR Enhancer有助于高GC含量片段的擴增。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 | |
10107ES62（125 U） | 10107ES78（5×125 U） | ||
10107-A | Hieff® Long Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 25 μL | 25 μL×5 |
10107-B | 10× Hieff® Long Taq Buffer（Mg2+ free） | 500 μL | 500 μL×5 |
10107-C | 25 mM MgCl2 | 1 mL | 1 mL×5 |
10107-D | dNTP Mix (10 mM each) | 100 μL | 100 μL×5 |
10107-E | 5 × PCR Enhancer | 125 μL | 125 μL×5 |
10107-F | 10 × Loading buffer | 1.25 mL | 1.25 mL×5 |
活性定義
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，74℃, 30 min內，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個活性單位（U）。
質量控制
核酸外切酶殘留檢測：20 μL反應體系，10 U本品和1 μg λDNA -HindIII，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
核酸內切酶殘留檢測：20 μL反應體系，10 U本品和1 μg λDNA，37℃溫育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
大腸桿菌殘留DNA檢測: 50 μL體系中，加入2 U本品，以無菌ddH2O為模板，擴增E.coil 16s rDNA 基因。30個循環后擴增產物進行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，無擴增條帶。
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20º℃保存，有效期1年。
注意事項
為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
PCR反應體系（推薦冰上配制）
組分 | 體積 |
ddH2O | to 50 μL |
10× Hieff® Long Taq Buffer（Mg2+ free） | 5 μL |
25 mM MgCl2 | 3-4 μL |
dNTP Mix (10 mM each) | 1 μL |
5 × PCR Enhancer | 適量 |
DNA模板 | 適量 |
Primer正向 (10 μM) | 2 μL |
Primer反向 (10 μM) | 2 μL |
Hieff® Long Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.5 μL |
【注】：
1）PCR Enhancer：推薦僅當擴增片段GC%> 60%且優化條件也無法正常擴增時用；可能會使保真度有輕微降低。
2）聚合酶濃度：酶量可在0.25-1 μL之間調整。通常情況下加大酶量可以提高擴增產量，但有可能會使特異性下降。
3）Mg2+終濃度：對于大多數由本酶催化的PCR反應來說，Mg2+的較優濃度為2 mM；如有特殊需要，可在終濃度1.5-2.5 mM區間內調整Mg2+濃度。
4）不同模板的推薦使用量（50 μL反應體系）
模板種類 | 用量 |
動植物基因組DNA | 10-200 ng |
大腸桿菌基因組DNA | 1-100 ng |
λDNA、質粒DNA | 0.1-10 ng |
PCR擴增程序
1）目的片段＜5 kb
循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 30 sec | 30-35 |
退火 | 55℃ | 30 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 7 min | 1 |
【注】:退火溫度需要根據引物退火溫度調整，一般設置成低于引物退火溫度1-2℃即可。
2）目的片段＞5 kb
循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
預變性 | 94℃ | 1-3 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-35 |
退火/延伸 | 68℃ | 30-60 sec/kb | |
終延伸 | 68℃ | 7 min | 1 |
【注】:對于> 5 kb的片段，推薦使用長引物， Tm值在68-70℃，把退火/延伸溫度合并為68℃。這樣可以顯著提高擴增特異性。延長延伸時間有助于提高擴增產量。
HB190523
