BALL-1細胞,人B淋巴細胞急性白血病細胞 培養需注意:
細胞培養實驗所需的物品、器材應進行嚴格的滅菌或購買無菌的一次性物品。玻璃瓶可擰松瓶蓋滅菌(指高壓蒸汽滅菌,以下同)或用鋁箔紙包住瓶口,和瓶蓋分別滅菌。其它玻璃和金屬器材用鋁箔紙包裹進行滅菌。玻璃吸管應塞上棉花球滅菌,然后置于烘箱中烘干。不適于進行高壓滅菌的瓶塞等其它物品,可浸泡在70%酒精中進行滅菌,然后在超凈工作臺上吹干。細胞培養液和其它不適于高壓滅菌的溶液,應通過過濾(采用0.22μm的孔徑的濾膜)滅菌。無菌培養室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖地面一次,并用紫外線照射滅菌30分鐘。超凈工作臺每次使用前用70%酒精擦拭,然后紫外線照射30分鐘。
進入無菌操作室要求穿著無菌工作服、工作帽、口罩。開始工作前用70%酒精對手、前臂及乳膠手套進行消毒。細胞培養等操作應在超凈工作臺或有空氣過濾器的空間內進行。操作前點燃酒精燈,細胞培養的所有操作,如打開或關上試管或培養瓶蓋等,都要靠近酒精燈并經過短時間的灼燒。燒過的實驗器械,冷卻后才能使用。已吸過培養液或其它有機液體的吸管不得再用火焰燒灼。不同液體分別用不同的吸管吸取,不能混用。開蓋后的培養瓶盡量避免垂直放置,同時瓶蓋應扣放在超凈工作臺上,以減少落入細菌的機會。細胞培養物在處理和使用前,不要過早暴露于空氣中。在進行轉移液體操作時,移液器不能觸及瓶口以避免細菌污染或交叉污染。放置吸管時管口向下傾斜,以防止液體倒流引起污染。培養細胞的廢棄用品,應放入可封裝的容器內。
BALL-1細胞,人B淋巴細胞急性白血病細胞 操作步驟:
- 采樣時應嚴格無菌操作。采樣時應用已滅菌的器械、無菌包裝的器皿和經過濾滅菌的緩沖溶液和培養液。采樣過程中盡量避免紫外線照射和接觸對細胞有毒害作用的化學試劑。在有污染因素存在的區域采樣時,應將樣品在含有500-1000U/ml的青、鏈霉素的PBS中漂洗3次,每次1-2分鐘。
- 在條件允許的情況下,宜采細胞易存活、增殖速度快的胚胎組織。
- 采樣時應用鋒利的器械切碎組織,盡可能減少對細胞的機械損傷。
- 采樣時應切除采樣組織外的其它成份,如附著在采樣組織上的血液、脂肪、神經組織、結締組織和壞死組織。修剪和切碎過程中,應將樣品浸泡于少量培養液中,以避免組織干燥。
- 采取的樣品應盡快培養。因故不能立即培養時,應將樣品切成1cm3以下的小塊,浸泡于培養液內,置于冰浴或4℃冰箱中。時間不能超過2小時。
- 采樣的同時要留好組織學標本和電鏡標本,以便于以后鑒別原代組織的來源和觀察細胞體外培養后與原組織的差異性。對樣品的來源、供體的一般情況(包括性別、年齡、健康狀況等)要做詳細的記錄以備查詢。
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