目錄:北京索萊寶科技有限公司>>免疫學>>ELISA試劑盒>> ELISA試劑盒小鼠白細胞介素-1β
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 48T/96T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | SEKM0002 | 應用領域 | 生物產業 |
| 主要用途 | 小鼠白細胞介素-1β含量測定 |
小鼠白細胞介素-1βELISA試劑盒
背景介紹：
IL-1分為IL-1a, IL-1β兩種,人和小鼠IL-1基因定位于2號染色體，均含7個外顯子。IL-1前體(ProIL-1)為31kDa，通過蛋白水解酶裂解形成成熟的IL-1分子。IL-1在不同種屬中有較高同源性。在氨基酸水平上，IL-1α和IL-1β在不同種屬同源性分別為60％～70％和75％～78％； IL-1α和IL-1β分子量約17.5kDa, 等電點分別為5和7，同源性為28％ 。 17kDa的成熟小鼠IL-1β與棉鼠和大鼠的IL-1β具有90%的氨基酸序列同一性，與犬、馬、貓、人、豬和猴的IL-1β具有65%-78%的同一性。
IL-1β主要由血液中的單核細胞和巨噬細胞產生 , 星形細胞，少突神經膠質細胞，腎上腺皮質細胞，NK細胞，內皮細胞，角質形成細胞，巨核細胞，血小板，神經元，中性粒細胞，成骨細胞，許旺細胞，滋養層細胞，T細胞和成纖維細胞也可產生IL-1β 。IL-1具有廣泛的免疫調節作用，并有致熱和介導炎癥的作用。
檢測原理：
Solarbio (Solarbio ®)ELISA試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯免疫吸附檢測技術。將抗小鼠IL-1β單克隆抗體包被在酶標板上；分別加入梯度稀釋的標準品和預稀釋的樣本，標準品和樣本中的小鼠IL-1β會與酶標板上的包被抗體充分結合；洗板后加入生物素化抗小鼠IL-1β抗體，該抗體會與板子上包被抗體捕獲的標準品和樣本中的小鼠IL-1β發生特異性結合；洗板后加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的鏈霉親和素，生物素與鏈霉親和素會發生高強度的非共價結合；洗板后加入顯色劑底物TMB，若反應孔中樣品存在不同濃度的小鼠IL-1β，則HRP會使無色TMB變成不同深淺（正相關）的藍色物質，加入終止液后反應孔會變成黃色；后，在λmax=450 nm（OD=450 nm）處測定反應孔樣品吸光度（OD），樣本中的小鼠IL-1β濃度與OD成正比，通過繪制標準曲線和四參數擬合軟件便可計算出樣本中小鼠IL-1β的濃度。
原理圖：
注意事項：※※※
蓋上，使用前請離心處理（5-10 S即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
安全提示：試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護；在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸，請用大量清水清洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時，請按國家生物實驗室安全防護有關管理規定執行。
試劑盒組成及儲存：
試劑盒組成 | 規格（96T） | 規格（48T） | 保存條件 |
抗體預包被酶標板
| 8*12 | 8*6 | 2-8℃ |
標準品 | 2支 | 1支 | -20 ℃ |
標準品/樣本稀釋液（SR1） | 16 ml/瓶 | 8 ml/瓶 | 2-8℃ |
濃縮生物素化抗體 | 120 ul(100X) | 60 ul(100X) | 2-8℃ |
抗體稀釋液（SR2） | 16 ml/瓶 | 8 ml/瓶 | 2-8℃ |
濃縮酶結合物（避光） | 120 ul(100X) | 60 ul(100X) | 2-8℃ |
酶結合物稀釋液（SR3） | 16 ml/瓶 | 8 ml/瓶 | 2-8℃ |
濃縮洗滌液 （20×） | 30 ml/瓶 | 15 ml/瓶 | 2-8℃ |
顯色底物（避光） | 12 ml/瓶 | 6 ml/瓶 | 2-8℃ |
終止液 | 12 ml/瓶 | 6 ml/瓶 | 2-8℃ |
封板膠紙 | 4張 | 2張 |
|
說明書 | 1份 | 1份 |
|
自備實驗器材（不提供，可代購）
樣本收集及儲存：
將細胞培養基移無菌離心管，在4℃條件下1000×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時內檢測可放入2-8℃儲存），避免反復凍融。
室溫血液自然凝固20 min后，在4℃條件下1000×g離心10 min，然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時內檢測可放入2-8℃儲存），保存過程中如有沉淀，請再次離心，避免反復凍融。
將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據標本的實際要求選擇EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合20 min，在4℃條件下1000×g離心10 min，然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時內檢測可放入2-8℃儲存），避免反復凍融。
※注意：血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本，以免影響檢測結果；如果樣本中的靶標物檢測濃度高于標準品的高值，請將樣品做適當倍數稀釋后檢測，建議正式實驗前做預實驗以確定稀釋倍數。
試劑準備：
3. 標準品梯度稀釋：加入標準品/樣本稀釋液（SR1）1ml凍干標準品中，靜置15分鐘待其*溶解后輕輕混勻(濃度為2000pg/ml)，然后按照以下濃度：2000、1000、 500、 250、125、62.5、31.25、 0 pg/ml進行稀釋。復溶過的標準品原液（2000pg/ml）未用完的應廢棄或根據需要按照一次用量分裝，并將其貯存在-20～-80℃冰箱，具體如下圖。
4. 生物素化抗體工作液：預先計算好試驗所需用量，用檢測稀釋液（SR2）將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍應用工作液（稀釋前充分混勻），請在30分鐘內加入到反應孔中。
生物素化抗體工作液具體稀釋方法如下：
板條 | 濃縮生物素化抗體（1:100）：μL | 檢測稀釋液（SR2）：μL |
2 | 20 | 1980 |
4 | 40 | 3960 |
6 | 60 | 5940 |
8 | 80 | 7920 |
10 | 100 | 9900 |
12 | 120 | 11880 |
5. 酶結合物工作液：按每次試驗所需用量配制，用酶結合物稀釋液（SR3）將100倍濃縮酶結合物稀釋成1倍應用工作液（稀釋前離心），請在30分鐘內使用。
酶結合物工作液具體稀釋方法如下：
板條 | 濃縮酶結合物（1:100）：μL | 檢測稀釋液（SR3）：μL |
2 | 20 | 1980 |
4 | 40 | 3960 |
6 | 60 | 5940 |
8 | 80 | 7920 |
10 | 100 | 9900 |
12 | 120 | 11880 |
6. 洗滌方法：
檢測步驟：
結果判斷：
1.用酶標儀 450 nm 波長測定 OD 值。選擇雙波長檢測，參考波長為 630 nm。如不能進行雙波長檢測，請用 450 nm 的OD測定值減去630 nm的OD測定值。
2.計算標準品、樣品的平均OD值：每個標準品和標本的OD值應減去零孔的OD值
3.以標準品濃度為橫坐標，吸光度OD值為縱坐標，用軟件繪制標準曲線，樣品中IL-1β含量可通過對應OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
4.若標本OD值高于標準曲線上限，應做適當稀釋后重新檢測，計算濃度時再乘以稀釋倍數。
參數表征：
1. 數據及標準曲線
標準品濃度(pg/ml) | OD值1 | OD值2 | 平均值 | 矯正值 |
0 | 0.066 | 0.051 | 0.0585 | ---- |
31.25 | 0.135 | 0.131 | 0.133 | 0.074 |
62.5 | 0.22 | 0.256 | 0.238 | 0.179 |
125 | 0.37 | 0.312 | 0.341 | 0.282 |
250 | 0.656 | 0.625 | 0.640 | 0.582 |
500 | 1.212 | 1.265 | 1.238 | 1.180 |
1000 | 2.112 | 2.098 | 2.105 | 2.046 |
2000 | 3.014 | 2.965 | 2.989 | 2.931 |
本圖僅供參考，應以當次試驗標準品繪制的標準曲線計算小鼠IL-1β的樣本含量
2. 靈敏度：
低可檢測小鼠IL-1β濃度達15pg/ml，
20個零標準品濃度OD的平均值加上兩個標準差，計算相應的可檢測濃度。
3. 特異性：
不與小鼠IL-2、3、4、6、7、10、IL-1a、IL-1Ra等反應
4. 重復性：
板內，板間變異系數<10%
5. 回收率：
在選取的健康小鼠血漿、細胞培養上清中加入 3 個不同濃度水平的小鼠 IL-1β，計算回收率。
樣本類型 | 平均回收率（%） | 范圍（%） |
血漿 | 97 | 81-101 |
細胞培養上清 | 102 | 90-105 |
6. 線性稀釋：
分別在選取的4 份健康小鼠血漿和細胞培養上清中加入高濃度小鼠 IL-1β，在標準曲線動力學范圍內進行稀釋，評估線性。
稀釋比例 | 回收率(%) | 血漿 | 細胞培養上清 |
1:2 | 平均回收率（% ） | 95 | 102 |
范圍(%) | 90-103 | 95-113 | |
1:4 | 平均回收率（% ） | 102 | 93 |
范圍(%) | 86-112 | 86-101 | |
1:8 | 平均回收率（% ） | 92 | 103 |
范圍(%) | 87-113 | 95-114 | |
1:16 | 平均回收率（% ） | 103 | 97 |
范圍(%) | 92-112 | 87-111 |
參考文獻：
1. Dinarello, C.A. (1994) Eur. Cytokine Netw. 5:517.
2. March, C.J. et al. (1985) Nature 315:641.
3. Sims, J.E. et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:8946.
4. Sims, J.E. et al. (1988) Science 241:585.
5. Huang, J. et al. (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:12829.
6. Wesche, H. et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:7727.
7. Sims, J.E. et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6155.
8. Giri, J.G. et al. (1994) J. Immunol. 153:5802.
9. Symons, J.A. et al. (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:1714.
10. Wewers, M.D. et al. (1997) J. Immunol. 159:5964.
11. Gonzales-Hernandez, J.A. et al. (1995) Clin. Exp. Immunol. 99:137.
常見問題及解決方法：
問題 | 可能原因 | 解決方法 |
高背景或陰性對照值偏高 | 洗板不充分 | 將洗滌液注入反應孔充分洗滌，*拍干孔中液體 |
酶結合物過量 | 檢查酶稀釋度，按說明書標識的稀釋度稀釋 | |
底物污染 | 加底物前檢查底物是否為透明無色，請勿用變藍的底物，重新用新的底物試驗 | |
陰性對照孔被陽性對照污染 | 注意洗滌時不要把洗液溢出孔外，不使陰陽對照孔液體漣接一起 | |
不同批次試劑混用 | 檢查試劑批號，請勿用不同批次試劑 | |
顯色信號弱 | 試劑過期 | 檢查試劑盒有效期，請勿用過期試劑 |
孵育時間過短 | 按說明書中規定的時間孵育 | |
試劑污染 | 檢查試劑是否污染，請勿用污染的試劑 | |
酶標儀濾光片不匹配 | 檢查酶標儀設置及濾光片是否匹配 | |
試劑盒平衡不充分 | 確保試劑盒試驗前平衡室溫 | |
顯色時間不夠 | 增加底物顯色時間 | |
無顯色信號 | 檢測抗體、酶、或顯色劑漏加 | 檢查試驗操作流程，重復試驗 |
酶被疊氮鈉污染 | 請使用重新配制的試劑 | |
試劑添加順序有誤 | 檢查復核試驗添加順序、流程，重復試驗 | |
標曲佳但樣品孔無信號 | 樣品中靶標物含量低或樣品中無靶標物 | 設置陽性對照，重復實驗 |
樣品基質效應影響檢測 | 重新稀釋樣品后復測 | |
標曲佳但樣品信號偏高 | 樣品中待檢物含量超過標準曲線范圍 | 重新稀釋樣品后復測 |
邊緣效應 | 孵育溫度不均衡 | 孵育時每步均使用新的封板膠紙，避免在環境溫度變化大的地方孵育，勿疊放反應板 |
小鼠白細胞介素-1βELISA試劑盒訂購說明：
1、絕大部分產品備有現貨，一般情況下都能訂貨當日發貨。
2、部分非常用產品，需提前1－2日預訂，海外期貨則需要提前3-6周預訂。
3、部分產品價格會因貨期、批次等因素發生變化，若有變動以訂貨當日新價格為準。
4、每日訂單截止時間為16點整，部分城市可到17點整，因超過截止時間造成當日不能發貨的將于次日安排發貨。
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運輸說明：
極低溫產品：極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
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