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大鼠白細(xì)胞介素-6/Rat IL-6 ELISA KI ELISA試劑盒

背景介紹：

    白細(xì)胞介素-6，簡稱白介素6 (IL-6)，是一種細(xì)胞因子，屬于白細(xì)胞介素的一種。它是由纖維母細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、上皮細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、以及多種瘤細(xì)胞所產(chǎn)生。IL-1、TNF-a, PDGF、病毒感染、雙鏈RNA及c AMP等，均可誘導(dǎo)正常細(xì)胞產(chǎn)生白介素6。白介素6能夠刺激參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞增殖、分化并提高其功能。

檢測原理：

    Solarbio (Solarbio ®)ELISA試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。將抗大鼠IL-6單克隆抗體包被在酶標(biāo)板上；分別加入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和預(yù)稀釋的樣本，標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的大鼠IL-6會與酶標(biāo)板上的包被抗體充分結(jié)合；洗板后加入生物素化抗大鼠IL-6抗體，該抗體會與板子上包被抗體捕獲的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的大鼠IL-6發(fā)生特異性結(jié)合；洗板后加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，生物素與鏈霉親和素會發(fā)生高強度的非共價結(jié)合；洗板后加入顯色劑底物TMB，若反應(yīng)孔中樣品存在不同濃度的大鼠IL-6，則HRP會使無色TMB變成不同深淺（正相關(guān)）的藍色物質(zhì)，加入終止液后反應(yīng)孔會變成黃色；后，在λmax=450 nm（OD=450 nm）處測定反應(yīng)孔樣品吸光度（OD），樣本中的大鼠IL-6濃度與OD成正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計算出樣本中大鼠IL-6的濃度。

原理圖：

注意事項：※※※

• 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。
• 試劑盒未使用時應(yīng)保存在2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請丟棄。
• 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù)30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
• 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持*。
• 為避免交叉污染，請在試驗中使用1次性試管，槍頭，封板膜（※）及潔凈塑料容器。.
• 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶 

蓋上，使用前請離心處理（5-10 S即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。

• 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試

劑代替本試劑盒中的某單個組分。

• 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

安全提示：試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護；在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸，請用大量清水清洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時，請按國家生物實驗室安全防護有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。

試劑盒組成及儲存：

自備實驗器材（不提供，可代購）

• 酶標(biāo)儀（主波長450nm，參考波長630nm）
• 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
• 洗板機或洗瓶
• 37℃孵育箱
• 雙蒸水，去離子水，量筒等
• 稀釋用聚丙烯試管

樣本收集及儲存：

• 細(xì)胞培養(yǎng)上清：

將細(xì)胞培養(yǎng)基移無菌離心管，在4℃條件下1000 g（3000 rpm）離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存），避免反復(fù)凍融。

• 血清樣本：

室溫血液自然凝固20 min后，在4℃條件下1000 g（3000 rpm）離心10 min，然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存），保存過程中如有沉淀，請再次離心，避免反復(fù)凍融。

• 血漿樣本：

將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據(jù)標(biāo)本的實際要求選擇EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合20 min，在4℃條件下1000 g（3000 rpm）離心10 min，然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存），避免反復(fù)凍融。

※注意：血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本，以免影響檢測結(jié)果；如果樣本中的靶標(biāo)物檢測濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品的高值，請將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測，建議正式實驗前做預(yù)實驗以確定稀釋倍數(shù)。

試劑準(zhǔn)備：

• 試劑回溫：先在實驗前30 min將試劑盒，待測樣本放置于室溫下，濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶，請放入37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解。
• 配制洗滌液：預(yù)先計算好稀釋后的洗滌液使用體積，然后用雙蒸水或去離子水將20倍濃縮洗滌液稀釋成1倍應(yīng)用液，未用完的濃縮洗滌液放入4℃冰箱保存。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋：加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液0.5ml凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，靜置15分鐘待其*溶解后輕輕混勻(濃度為4000pg/ml)，然后按照以下濃度：4000、2000、1000、 500、 250、125、62.5、0 pg/ml進行稀釋。復(fù)溶過的標(biāo)準(zhǔn)品原液（4000pg/ml）未用完的應(yīng)廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝，并將其貯存在-20～-80℃冰箱，具體如下圖。

4. 生物素化抗體工作液：預(yù)先計算好試驗所需用量，用生物素化抗體稀釋液將30X濃縮生物素化抗體稀釋成1X應(yīng)用工作液（稀釋前充分混勻），請在30分鐘內(nèi)使用。

5. 酶結(jié)合物工作液：按每次試驗所需用量配制，用酶結(jié)合物稀釋液將30X濃縮酶結(jié)合物稀釋成1X應(yīng)用工作液（稀釋前離心），請在30分鐘內(nèi)使用。

6. 洗滌方法：

• 自動洗板：甩盡酶標(biāo)板孔中液體，在厚迭吸水紙上拍干，注入洗滌液為300ul/孔,注

與吸出間隔為30秒，洗板5次。

• 手工洗板：甩盡酶標(biāo)板孔中液體，在厚迭吸水紙上拍干，用洗瓶加入洗滌液300ul/孔，靜止30秒后甩凈酶標(biāo)板孔中液體，在厚迭的吸水紙上拍干，洗板5次。

檢測步驟：

結(jié)果判斷：

1.用酶標(biāo)儀 450 nm 波長測定 OD 值。選擇雙波長檢測，參考波長為 630 nm。如不能進行雙波長檢測，請用 450 nm 的OD測定值減去630 nm的OD測定值。

2.計算標(biāo)準(zhǔn)品、樣品的平均OD值：每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值

3.以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度OD值為縱坐標(biāo)，用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品中IL-6含量可通過對應(yīng)OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

4.若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測，計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù)。

參數(shù)表征：

1. 數(shù)據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)曲線

本圖僅供參考，應(yīng)以當(dāng)次試驗標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算大鼠IL-6的樣本含量

2. 靈敏度：

低可檢測大鼠IL-6濃度達30pg/ml，

20個零標(biāo)準(zhǔn)品濃度OD的平均值加上兩個標(biāo)準(zhǔn)差，計算相應(yīng)的可檢測濃度。

3. 特異性：

不與CINC-1，GDNF，GM-CSF，IFN-γ，IL-1，IL-2，IL-4，IL-10，IL-18，PDGF-BB，TNF-α等反應(yīng)

4. 重復(fù)性：

板內(nèi)，板間變異系數(shù)<10%

5. 回收率：

健康大鼠血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入 3 個不同濃度水平的大鼠 IL-6，計算回收率。

6. 線性稀釋：

選取4 份健康大鼠血清加入高濃度大鼠 IL-6，在標(biāo)準(zhǔn)曲線動力學(xué)范圍內(nèi)進行稀釋，評估線性。

參考文獻：

1. Heinrich, P.C. et al. (1998) Biochem J 334 ( Pt 2), 297-314.

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10. Tackey E, et al (2004). Lupus 13 (5): 339–43.

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12. Hong, D.S. et al. (2007) Cancer 110, 1911-28. 13. Nishimoto N (2006). Curr Opin Rheumatol 18 (3): 277–81

常見問題及解決方法：

大鼠白細(xì)胞介素-6/Rat IL-6 ELISA KI ELISA試劑盒訂購說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動以訂貨當(dāng)日新價格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時間為16點整，部分城市可到17點整，因超過截止時間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請辦理完貨款后，將底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

ELISA試劑盒運輸說明：

極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達您的手中。