臺盼藍染色:如果細胞膜不完整、破裂,臺盼藍染料進入細胞,細胞變藍,即為壞死。如果細胞膜完整,細胞不為臺盼藍染色,則為正常細胞或凋亡細胞。此方法對反映細胞膜的完整性,區別壞死細胞有一定的幫助。
用品:
1. 4%臺盼藍母液:稱取4g臺盼藍,加少量蒸餾水研磨,加雙蒸水至100ml,用濾紙過濾,4度保存。使用時。用PBS稀釋至0.4%。
2. 吸管、血細胞計數板、顯微鏡
步驟:
1、制備單細胞懸液。并作適當稀釋(10 *6 細胞/ml)
2、染色:取9mL細胞懸液移入試管中,加1mL0.4%臺盼藍溶液,混勻。
3、觀察
注意事項:臺盼藍染細胞時,時間不宜過長。否則,部分活細胞也會著色,會干擾計數。
臺盼藍主要用來鑒定原代培養細胞時,細胞分離后的存活情況,用0.4%臺盼藍直接染色,在顯微鏡下觀察即可,活細胞不被染色。方便易用,因此在實驗室中比較常用,尤其在心肌細胞原代培養中。
臺盼蘭染色法價格低廉,操作簡單,又不用無菌操作,做這個實驗只要是把顯微鏡調好了,細胞濃度調好了就不會有問題,是一個養細胞的入門實驗,所以很適合初學者做。我做這個實驗主要是用來確定抑制細胞增殖的藥物濃度,排除濃度過大引起的毒性反應