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臺盼藍之細胞染色

時間:2009/12/31閱讀:9498
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臺盼藍(Trypan Blue,也稱Direct blue 14):一種死細胞染色用色素

化學名:
3,3'-{[3,3'-Dimethyl(1,1'-biphenyl)-4,4'-diyl]bis(azo)}bis(5-amino-4-hydroxy-2,7-naphthalenedisulfonic acid), tetrasodium salt3,3’-{[3,3’-二甲基-(1,1’-二苯基)-4,4’-二基]雙(偶氮)}-雙(5-氨基-4-羥基-2,7-萘二磺酸),四鈉鹽

分子式:C34H24N6Na4O14S4
分子量:960.81
CAS Number: 72-57-1
外觀:黑褐色結晶粉末
摩爾吸光度:>69,000(在606nm附近)

染色原理:
細胞損傷或死亡時,臺盼藍可穿透變性的細胞膜,與解體的DNA 結合,使其著色。而活細胞能阻止染料進入細胞內。故可以鑒別死細胞與活細胞。嚴格來說,臺盼藍染色檢測的是細胞膜的完整性,通常認為細胞膜喪失完整性,即可認為細胞已經死亡。這被稱為染料排除測試(dye exclusion),Erythrosin B(紅色)、negrosine、eosin Y、AO和EB也用于此目的。通過顯微鏡很容易就能識別出死亡的被臺盼藍染色的細胞,并可使用細胞計數器進行計數。

溶于水,可以配制成10mg/ml的水溶液,水溶液呈深藍色。
臺盼藍主要用來鑒定原代培養細胞時,細胞分離后的存活情況,用0.4%臺盼藍直接染色5-10分鐘,在顯微鏡下觀察即可。

應用于細胞凋亡:
如果細胞膜不完整、破裂,臺盼藍染料進入細胞,細胞變藍,即為壞死。如果細胞膜完整,細胞不為臺盼藍染色,則為正常細胞或凋亡細胞。盡管在凋亡的早期到中期檢測是很困難的,此方法對反映細胞膜的完整性,區別壞死細胞有一定的幫助。

儲存條件:常溫保存

注意事項:
1. 臺盼藍對人體有毒
2. 臺盼藍染細胞時,時間不宜過長。否則,部分活細胞也會著色,會干擾計數。
3. 臺盼藍染色法對于懸浮細胞來說,還比較方便,對貼壁細胞來說,較為繁瑣。因為要消化,有時,96孔板不一定能消化干凈。而且,該法是測定細胞濃度的方法,與細胞懸液的體積有關,加入的胰蛋白酶或1640要計入終體積。可以說,該法相對準確,可能有一些人為因素的干擾。

 

臺盼藍染色
通常認為細胞膜喪失完整性,細胞即可被認為已經死亡。臺盼藍(Trypan Blue)是檢測細胞膜完整性zui常用的生物染色試劑。健康的正常細胞能夠排斥臺盼藍,而死亡的細胞,膜的完整性喪失,通透性增加,細胞可被臺盼藍染成藍色。依據此原理,細胞經臺盼藍染色后,可通過顯微鏡,直接鏡下計數或拍照后計數,實現對細胞存活率比較的定量分析。  
     賽馳生物開發的細胞存活率檢測試劑盒(Cell Viability Assay Kit)以進口試劑為原料精心配制而成。該產品使用方便,操作簡單,全部操作只需3-5分鐘即可完成。本產品還配有細胞稀釋液,以便用戶在細胞密度較高時,可以很方便的進行計數細胞的稀釋。   
包裝清單

細胞存活率檢測試劑盒

130000-T

130000-T1

130000-T2

臺盼藍染色試劑

5ml

10ml

30ml

細胞稀釋液

30ml

60ml

120ml

說明書

1份

1份

1份

保存條件
     4℃、無菌、密封保存,一年有效。
使用說明
    1.收集細胞
     貼壁細胞    先用胰酶和/或EDTA消化,吹打分散成單個細胞懸液;
     懸浮細胞    直接吹打瓶底使成細胞懸液;
     收集細胞懸液,用細胞稀釋液適當稀釋;或離心棄上清,估測細胞數量,向沉淀中適量加入細胞稀釋液,吹打重懸細胞。
     2.臺盼藍染色
     吸取100微升細胞懸液到EP管內,加入臺盼藍染色液100微升,輕輕吹打混勻,3-5分鐘(染色時間不宜過長)后滴板計數。  
     3.細胞存活率分析
     吸取適量加有臺盼藍染色液的細胞懸液,滴加血細胞計數板計數。于大方格內分別計數細胞總數和藍染細胞數。
     細胞存活率=(細胞總數-藍色細胞數)/細胞總數X100%。
     注意事項
     本產品所提供的兩種溶液均經過濾除菌,取用時在超凈臺內進行,以免微生物污染。  
     染色試劑具有潛在的致癌性,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作

 

 

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