獲得用于定量 Western 印跡的金標(biāo)準(zhǔn) 蛋白歸一化是獲得可靠且可重現(xiàn)的定量 Western 印跡的關(guān)鍵步驟。總蛋白歸一化被視為定量 Western 印跡的金標(biāo)準(zhǔn)。許多主流期刊已經(jīng)制定了提交 Western 印跡研究的指南，指南中的相關(guān)引文展示如下。
?“為進(jìn)行定量比較，應(yīng)使用適當(dāng)?shù)脑噭φ掌泛途哂芯€性信號轉(zhuǎn)導(dǎo)范圍的成像方法" – 性質(zhì) ? “記錄如何獲得數(shù)據(jù)、信號強(qiáng)度是否與抗原上樣呈線性關(guān)系以及如何歸一化蛋白上樣量" – Journal of Biological Chemistry ? “將信號強(qiáng)度歸一化至總蛋白上樣量（通過染色膜對總蛋白進(jìn)行評估）（如果可能）" – Journal of Biological Chemistry ? “在沒有證據(jù)證明操作步驟不會影響表達(dá)時不應(yīng)使用管家蛋白" – Journal of Biological Chemistry
準(zhǔn)確的上樣對照應(yīng)在所有實驗條件下顯示信號強(qiáng)度與樣品上樣量之間的線性關(guān)系。通過使用 No-Stain 試劑標(biāo)記膜上總蛋白獲得的信號強(qiáng)度，就可在所有實驗條件下，確保與樣品上樣量呈線性關(guān)系（參見下圖）。因此，在定量 Western 印跡應(yīng)用中使用 No-Stain 試劑可以使用總蛋白作為理想上樣對照。
1
化工儀器網(wǎng)