Co-IP 是研究蛋白:蛋白相互作用的常用方法,其使用抗體對(duì)抗原(誘餌蛋白)進(jìn)行免疫沉淀,對(duì)任何相互作用蛋白(獵物蛋白)進(jìn)行免疫共沉淀。使用蛋白 A 或 G 的傳統(tǒng) co-IP 方法可導(dǎo)致抗體重鏈和輕鏈的共洗脫,而這些重鏈和輕鏈可能與相關(guān)條帶共遷移,掩蓋了重要的結(jié)果。Pierce Co-IP 試劑盒通過(guò)將抗體共價(jià)偶聯(lián)至胺反應(yīng)性樹(shù)脂上,解決了該問(wèn)題。該試劑盒包含用于蛋白結(jié)合和回收的優(yōu)化緩沖液、進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)所需的試劑以及高效離心柱和收集管,可縮短方案并盡量減少操作和混合。
免疫共沉淀試劑盒的特點(diǎn):
?適用于任何純化抗體—使用任何純化抗體進(jìn)行 co-IP 實(shí)驗(yàn),無(wú)論物種或 Ig 類(lèi)別(雞 IgY、人 IgE、小鼠 IgG1、IgM 等)如何;不依賴(lài)蛋白 A 和蛋白 G 的親和結(jié)合 ? 無(wú)抗體干擾—共價(jià)結(jié)合方法和非還原洗脫系統(tǒng)可以產(chǎn)生純 co-IP 產(chǎn)品,該產(chǎn)品不會(huì)被 IP 抗體污染 ? 可重復(fù)使用的抗體微珠—共價(jià)抗體固定化允許重復(fù)使用制備的 IP 樹(shù)脂,并可能節(jié)省昂貴抗體 ? 全套試劑盒—所有用于抗體固定和許多 IP 實(shí)驗(yàn)的試劑,包括結(jié)合和洗滌緩沖液、洗脫緩沖液和便利的微量離心柱,使樹(shù)脂操作更加簡(jiǎn)單和高效。 ?隨附對(duì)照微珠—提供未衍生化瓊脂糖微珠,用作非特異性結(jié)合的陰性對(duì)照 ? 通用—co-IP 方法與任何生理(非變性)蛋白樣品緩沖液兼容,緩沖液與特異性抗體抗原和蛋白相互作用復(fù)合物兼容。
免疫共沉淀 (Co-IP) 是一種用于發(fā)現(xiàn)蛋白相互作用的常用體外方法。Pierce 免疫共沉淀試劑盒經(jīng)過(guò)配置,是有效進(jìn)行 Co-IP 實(shí)驗(yàn)的基本工具,能夠產(chǎn)生不含棘手的 IP 抗體的純 IP 和 co-IP 產(chǎn)物。通過(guò)使用可直接且偶聯(lián)純 IP 抗體的 AminoLink Plus 樹(shù)脂替代蛋白 A/G 瓊脂糖微珠,對(duì)傳統(tǒng) co-IP 技術(shù)實(shí)現(xiàn)這種改善。溫和(非還原、非變性)洗脫緩沖液可實(shí)現(xiàn)在保留瓊脂糖微珠上固定化抗體的同時(shí)解離 IP 靶標(biāo)。結(jié)果是獲得一種可通過(guò) Western 印跡(或甚至測(cè)序)進(jìn)行分析的純產(chǎn)物,無(wú)抗體干擾。
除消除 IP 抗體污染外,構(gòu)成 Pierce Co-IP 試劑盒的抗體偶聯(lián)方法還可避免傳統(tǒng)蛋白 A 和蛋白 G 方法產(chǎn)生的非特異性結(jié)合相互作用和浸出污染。盡管偶聯(lián)方法要求起始抗體包含在不含 BSA、明膠和其他貯藏蛋白穩(wěn)定劑的無(wú)胺緩沖液中,但其不依賴(lài)于蛋白 A 或蛋白 G 這一事實(shí)意味著任何抗體種類(lèi)或類(lèi)別均可用于 IP(例如,IgM 和雞 IgY)。實(shí)際上,任何純化的蛋白都可以固定化用于結(jié)合配偶體的親和純化。