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確保厭氧培養(yǎng)箱內(nèi)的無菌環(huán)境,需要遵循以下要點:
1. 設(shè)備清潔與消毒:定期使用適當?shù)南緞┣鍧嵟囵B(yǎng)箱內(nèi)外表面,包括操作臺、門把手等高頻接觸區(qū)域。使用0.1%苯扎溴銨溶液或2%甲醛液擦拭工作臺面及可能污染的死角,濕拖地面。
2. 無菌操作:操作人員在進入操作區(qū)域前,應(yīng)穿戴無菌工作服、口罩和手套,確保個人衛(wèi)生。在操作過程中,應(yīng)避免大幅度或快速動作,以免攪動空氣中的塵埃微粒。
3. 物品消毒:所有進入培養(yǎng)箱的物品必須經(jīng)過嚴格的表面消毒處理。例如,安瓿瓶先用砂輪劃痕后用2%碘酒棉球擦拭,再用75%酒精棉球擦拭待干。
4. 無菌空氣過濾器:確保培養(yǎng)箱內(nèi)的空氣過濾系統(tǒng)正常工作,以維持內(nèi)部的無菌環(huán)境。定期檢查和更換過濾器,以防止微生物污染。
5. 紫外線滅菌:使用紫外線燈進行定期滅菌,確保操作室內(nèi)無菌。滅菌時間應(yīng)根據(jù)實際情況自定。
6. 操作室內(nèi)環(huán)境監(jiān)測:定期監(jiān)測操作室內(nèi)的微生物污染情況,包括沉降菌落計數(shù)和浮游菌測定,以確保環(huán)境符合無菌標準。
7. 氣體管理:確保厭氧培養(yǎng)箱內(nèi)的氣體供應(yīng)穩(wěn)定,及時更換氣體瓶和厭氧指示劑等。在操作過程中,避免在開啟門的情況下進行操作,以免破壞厭氧環(huán)境。
8. 設(shè)備維護:定期檢查厭氧培養(yǎng)箱的各個部件,包括溫度控制器、傳感器、厭氧氣體入口、排氣閥和觀察窗等,確保它們處于良好的工作狀態(tài)。
9. 操作規(guī)范:建立和遵循標準操作規(guī)程(SOP),確保每次實驗前凈化系統(tǒng)至少運轉(zhuǎn)1小時以上,同時開啟凈化臺和紫外燈。
10. 環(huán)境監(jiān)測:使用適當?shù)呐囵B(yǎng)基進行環(huán)境微生物監(jiān)測,如胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基(TSA),并在必要時加入中和劑,以避免假陰性結(jié)果。
通過嚴格執(zhí)行這些要點,可以最大限度地減少微生物污染的風(fēng)險,確保厭氧培養(yǎng)箱內(nèi)的環(huán)境適合無菌微生物的培養(yǎng)。
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