線性PEI轉(zhuǎn)染試劑

產(chǎn)品貨號：P4000

存儲(chǔ)條件：室溫運(yùn)輸，粉末在室溫或4 oC保存，有效期2年。儲(chǔ)存液 在4 oC保存，有效期至少6個(gè)月。

產(chǎn)品簡介

Polyethylenimine Linear（PEI）溶液是由一種陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑，分子量40000，它能與核酸形成復(fù)合物，并使該復(fù)合物進(jìn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑適用廣泛。該試劑可在含血清與抗生素的*培養(yǎng)基中發(fā)揮作用，即使在有血清存在的情況下，它仍然能高效的將核酸導(dǎo)入細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)操作簡單，對大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞都有較高的轉(zhuǎn)染效率(用于常見細(xì)胞系，如HEK-293、HEK293T、Hep G2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等)，并且細(xì)胞毒性較低。

儲(chǔ)存液配置（1 mg/mL）

1.材料

PEI 40000、Milli-Q® 水/注射用水（WFI）或類似的生物級水、1 mol/L氫氧化鈉（NaOH）、一次性0.1~0.2 μm PES真空無菌過濾器、無菌HDPE或聚丙烯儲(chǔ)存瓶。

2. 配置儲(chǔ)存液（1 mg/mL）

1）于1 L玻璃燒杯，將1g PEI 40000粉末加入900 mL Milli-Q®超純水或其他相當(dāng)級別的生物用水中，在磁子攪拌器上攪拌均勻，產(chǎn)生小渦。

2）待PEI 40000*溶解（通常不到5min）；

3）邊攪拌邊滴加1 mol/L氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH為6.90~7.10；

注：如果pH值>7.10，請使用鹽酸將pH值調(diào)至6.90~7.10；

4）將溶液轉(zhuǎn)入量筒內(nèi)，并加水定容到1 L。

5）用一次性0.1~0.2 µm PES真空過濾器過濾除菌，即得到1 mg/mL的儲(chǔ)存液。

6）根據(jù)需要分裝并儲(chǔ)存在4 °C，至少6個(gè)月穩(wěn)定。

操作流程（以6孔板為例）

1.細(xì)胞鋪板

提前一天將細(xì)胞種植在六孔板中，以轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度在70%~80%為宜。

2.轉(zhuǎn)染過程

1）在轉(zhuǎn)染前2h，移除細(xì)胞上原有的培養(yǎng)基，換為新鮮的*培養(yǎng)基。

2）將2ug質(zhì)粒DNA用50uL無血清稀釋液稀釋，充分混勻制成DNA稀釋液。

注意：無血清稀釋液建議采用Opti-MEM或ddH2O

3）向DNA稀釋液中直接加入4uL轉(zhuǎn)染試劑，室溫靜置10~15min。轉(zhuǎn)染復(fù)合物配制完成。

4）將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入細(xì)胞培養(yǎng)基中，輕柔混勻。

5）繼續(xù)培養(yǎng)24~48h，收取細(xì)胞進(jìn)行鑒定或加入相應(yīng)抗生素篩選穩(wěn)定克隆。

6）使用本產(chǎn)品轉(zhuǎn)染后一般在24h開始進(jìn)入表達(dá)高峰期，36~48h達(dá)到表達(dá)高峰，相對于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劉，達(dá)到峰值的時(shí)間延后約6~12h。

不同細(xì)胞培養(yǎng)容器轉(zhuǎn)染用量

注意事項(xiàng)

1、對大多數(shù)細(xì)胞來而言，每1μg DNA 使用3.0μL PEI MAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。也可嘗試每1μg DNA使用 1.5~4 μL體積線性PEI 40000轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。

2、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套及通風(fēng)櫥操作。

3、本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于人體。