PCR,是一種分子生物學技術,用于擴增特定的DNA片段,這種方法可在生物體外進行,不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。PCR這項技術,被廣泛地運用在醫學和生物學的實驗室。
熒光PCR擴增儀是分子診斷實驗室的重要工具,直接影響臨床檢測結果的準確性、重復性、甚至工作效率。熒光PCR儀器品牌的選擇,是實驗室質量保證的關鍵環節。
依據PCR儀工作原理選擇機型
熱模塊:
由于PCR擴增儀器為96個樣本同時進行擴增和檢測,每個檢測孔的溫控一致是理想狀態。不同PCR擴增儀的升降溫原理不同,如壓縮機、半導體或空氣傳導,升降溫速度差異較大。有的PCR儀器由多個加熱模塊拼接,長期使用后容易出現某一個加熱模塊損壞,給臨床報告帶來麻煩。臨床檢測不單單有質量要求,有時容不得報告的拖延,因此選擇整體加熱模塊和故障率的儀器,也是提升實驗室質量的因素之一。
光學模塊:
PCR擴增信號的采集,是熒光PCR儀器定量的靈魂,決定了96個樣本孔間信號采集的均一性。從擴增管上部采集熒光信號的方式,由于經過管蓋和空氣部分,容易導致熒光信號衰減或折射,不同核酸濃度的擴增效率易產生差異,而側面采集熒光信號儀器,則能有效避免上部熒光采集存在的缺陷,獲得顏值較高的擴增曲線。
軟件系統
計算機對每個擴增熒光信號進行擬合,依據標準曲線得出檢測樣本的結果,分析基線的設置原則以擴增曲線熒光值的5%為準,這恰好是PCR擴增儀容易產生噪音的位置,因此軟件具有依據整體擴增趨勢進行優化的功能顯得尤為重要,從而使獲得的熒光曲線趨于光滑,而得出重復性較好的結果。對擴增效率較差的PCR試劑盒,如果在沒有曲線優化功能的PCR儀上擴增,將獲得顏值極差的擴增曲線,甚至無法判斷結果,針對這一情況,有些試劑廠家針對不同的PCR儀器制作相應的試劑盒。
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