磁珠提取實時熒光定量PCR技術是指在PCR反應體系中加入熒光染料或熒光集團,利用熒光信號來實時監測整個PCR進程,然后通過標準曲線對未知模板濃度進行定量分析。
病原學檢測是動物疾病確診的關鍵點,而聚合酶鏈式反應(PCR)是目前病原檢測的常用的分子生物學技術,具有高敏感性的特征。PCR技術發展已日趨完善,并在此基礎上建立了實時熒光定量PCR、套式、多重、降落PCR等技術,逐漸成為實驗室常規檢測手段。
該技術已經被廣泛應用于臨床疾病診斷各種傳染病診斷和療效評價;臨床疾病診斷動物疾病檢測;食源微生物、食品過敏源、轉基因研究等食品安全操作等等各個領域。
擴增曲線是PCR過程中,以循環數為橫坐標,以熒光強度為縱坐標所繪制的曲線。主要用于反映qPCR的動態進程;溶解曲線是用來驗證擴增產物特異性的,如果產物是單一條帶,溶解曲線就會出現單峰,如果有引物二聚體或其它非特異性擴增,就會出現至少兩個峰。
磁珠提取實時熒光定量PCR在基因分型中的應用:
例如SNP檢測,甲基化檢測等。
SNP檢測是確定一對染色體的每種基因的兩個拷貝,哪種點突變在這兩個拷貝中存在,因此利用熒光定量PCR方法,并配合芯片技術可以快速靈敏的檢測到SNP結果。
DNA甲基化是Z早發現的基因表觀修飾方式之一,真核生物中的甲基化僅發生于胞嘧啶,即在DNA甲基化轉移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶轉變為5’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表達,去甲基化則誘導了基因的重新活化和表達。
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