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產品名稱：兔嗅鞘細胞

組織來源：嗅球

產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

培養信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：神經元、上皮細胞樣

傳代特性：可傳1代，不建議傳代

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔嗅鞘體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

細胞簡介：

兔嗅鞘分離自嗅球組織；嗅鞘細胞（OECs）是在功能上介于施旺細胞和少突膠質細胞之間的一種特殊的膠質細胞，具有神經營養、抑制膠質增生、瘢痕形成、成鞘作用等；為軸突生長提供了適宜的微環境及較強的遷移的特性，使其成為促進中樞神經再生的理想候選細胞之一。嗅鞘細胞是目前所發現的極少數的中樞神經系統可以再生細胞之一，其特點為終身具有神經再生功能，還能夠釋放多種神經營養因子、神經粘附分子。被認為是髓鞘化能力強的膠質細胞，逐漸用于治療脊髓損傷。嗅鞘細胞與膠質細胞、雪旺細胞在表現型上有共同點，它們都能促進軸突的再生，主要區別在于嗅鞘細胞不但存在于中樞神經系統，也存在于外周神經中。嗅鞘細胞被認為是一種可塑性很高的細胞，它可表現出多種細胞形態和細胞表面標志，在嗅系統發育過程中，嗅鞘細胞根據其在組織定位的不同而有不同的抗原表型，其中P75NTR、GFAP、和O4可標記大部分在體嗅鞘細胞，然而在嗅球外神經層O4陽性嗅鞘細胞仍然可以在P75NTR陽性細胞層內分化成E-NCAM陽性的細胞層，還有一定比率的嗅鞘細胞P75NTR陰性而NY和S100表型為陽性。嗅黏膜中的神經元是生后才生長并在成年時繼續分化的神經元，壽命為4-12周，隨著新細胞的生長，又建立了新的神經支配關系。嗅鞘細胞存在于嗅神經及嗅球的神經層上，沿嗅神經的全長，從周圍神經系統到中樞神經分布。

方法簡介：

實驗室分離的兔嗅鞘采用-膠原酶聯合消化法、結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的兔嗅鞘經GFAP免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養步驟：

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。
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收到細胞如何處理？

1、首先，觀察細胞培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯系（所拍照片將作為后續服務依據）。

2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時，以便穩定細胞狀態。

3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態（所拍照片將作為后續服務依據）；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養瓶內培養基，預留5ml左右繼續培養，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細胞：將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養，補加培養基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續培養，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作