熒光pcr凍干粉和普通的pcr相比具有很多優(yōu)點，可以常溫運輸，常溫儲存，保存時間長，使用方便，性質(zhì)穩(wěn)定等。但是熒光PCR試劑并不是拿過來放進凍干機中就可以直接凍干了，凍干物質(zhì)的共同特點是基本上90%以上的凍干物質(zhì)都需要添加凍干保護劑包括賦形劑，否則容易不成型或者凍出來不理想。
那么熒光PCR試劑凍干常采用哪些凍干保護劑呢？首先我們先來看兩個發(fā)明。以下出自發(fā)明專：
1、本發(fā)明提供一種凍干添加劑及熒光PCR反應(yīng) 混合物干粉和制備方法，具體涉及生物技術(shù)領(lǐng) 域，凍干添加劑包括A組分和B組分，A組分由二硫蘇糖醇、吐溫20、海藻糖、明膠和BSA組成，B組分 由叔丁醇組成。將該A組分加入到熒光PCR反應(yīng)混合物原液的其他組分中存儲待用，凍干前再將B 組分加入獲得熒光PCR反應(yīng)混合物原液，后凍 干得到熒光PCR反應(yīng)混合物干粉。本發(fā)明制備的 熒光PCR反應(yīng)混合物干粉保證擴增性能的同時， 縮短凍干時間，減少凍干成本，并使凍干后的成 品結(jié)實，不易碎，并且能長期保存。該發(fā)明出自《一種凍干添加劑及熒光PCR反應(yīng)混合物干粉和制備方法》。
2、本發(fā)明公開一種熒光PCR試劑的凍干保護劑 以及凍干芯片的制備方法，涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng) 域。所述凍干保護劑為由以下組分制備得到的溶 液：海藻糖、棉子糖、右旋糖酐、甘油，以及焦磷酸二乙酯處理過的水。由該凍干保護劑制備得到的熒光PCR凍干制劑可長期常溫保存，且復(fù)溶速度快。本發(fā)明還提供一種包括上述凍干保護劑的熒光PCR凍干芯片的制備方法，該方法簡單快速，可在八小時內(nèi)完成凍干步驟。該發(fā)明出自《熒光PCR試劑的凍干保護劑以及凍干芯片的制備方法》。
通過以上兩個發(fā)明可以看出熒光PCR試劑的凍干保護劑常用的包括：1、糖類和多元醇類。糖類有單糖、低聚糖、多糖。其中海藻糖和棉子糖屬于低聚糖，一般凍干保護劑中的糖多用低聚糖或者單糖和其他保護劑連用。海藻糖和蔗糖是糖類中zui常用的。兩個發(fā)明中均有使用海藻糖。常用的多元醇類包括：山梨醇、甘露醇和甘油（丙三醇）。其中甘露醇和甘油都是比較常用的。2、聚合物：聚合物具有能提高生物制品混合溶液的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度，同時起著低溫保護劑和脫水保護劑的作用。其中，典型的的聚合物類保護劑有聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、牛血清（BSA）、右旋糖苷（dextran）、聚乙二醇（PEG）等。 3、表面活性劑既能在凍結(jié)和脫水過程中降低冰水界面張力所引起的凍結(jié)和脫水變性；又能在復(fù)水過程中對活性組分起到潤濕劑和重褶皺劑的作用。 常用的包括吐溫\Triton X-100\蔗糖脂肪酸脂、十二烷基硫酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚。4、氨基酸類的保護劑：如甘氨酸，谷氨酸等。這兩個配方中沒有添加。氨基酸離子具有酸、堿兩性，因此能夠在生物制品的低溫保存和冷凍干燥過程中能抑制溶液的pH變化，從而達到保護活性組分的目的。
緩沖劑：調(diào)節(jié)PH，保持ph的穩(wěn)定。常見的多為鹽類如：磷酸、乙二胺四乙酸、氯化鈉、氯化鈣、磷酸鹽、醋酸鹽和檸檬酸鹽等。6、叔丁醇：在凍干配方中加入適量的叔丁醇（Tertiary Butyl Alcohol）后，凍結(jié)時會形成針狀結(jié)晶；冰晶升華后，留下了管狀通道，使水蒸汽流動阻力大大減小，升華速率顯著提高。
從以上分析可以看出基本上一個完整的凍干保護劑體系是由多種保護劑連用。其中有的起保護作用，有的起調(diào)節(jié)穩(wěn)定作用，有的起加速作用，還有的起填充劑和賦形劑的作用。其實按照凍干保護劑的篩選原則，逐步篩選優(yōu)化就能找到凍干保護劑的組合配方。由于不同的熒光PCR體系成分不一樣，因此所采用的凍干保護劑量和種類不同，需要根據(jù)情況選擇合適的糖、多元醇、活性劑及緩沖劑等。
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