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熒光定量PCR的凍干(一)

閱讀:2819      發(fā)布時(shí)間:2020-4-28
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熒光定量PCR和普通PCR相比由于具有很多優(yōu)點(diǎn),所以目前對(duì)熒光pcr的研究很火。熒光PCR的優(yōu)點(diǎn)包括:1、可以高靈敏檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞。2、高特異性和精確性 ,將DNA雜交的高特異性和光譜技術(shù)的高精準(zhǔn)性融合,應(yīng)用熒光探針和光電傳導(dǎo),直接探測(cè)基因擴(kuò)增過程中熒光信號(hào)的變化,以獲得定量結(jié)果,相當(dāng)于在PCR反應(yīng)過程中自道動(dòng)完成了Northern雜交;3、操作版簡便、速度快 。通過計(jì)算機(jī)和分析軟件實(shí)現(xiàn)PCR擴(kuò)增、產(chǎn)物檢測(cè)和定量分析一體化;4、安全、無污染。 FQ-PCR在全封閉狀態(tài)下進(jìn)行PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物分析,杜絕了傳統(tǒng)PCR開放檢測(cè)對(duì)環(huán)境的污染和由此導(dǎo)致的假權(quán)陽性;5、結(jié)果觀測(cè)重復(fù)性好。 一起在線實(shí)時(shí)觀測(cè),結(jié)果判斷直觀,避免人為因素干擾。

熒光定量PCR雖然具有很多優(yōu)點(diǎn),但是熒光定量PCR擴(kuò)增反應(yīng)試劑在保存、運(yùn)輸和使用過程中要求在低溫條件下進(jìn)行,否則診斷試劑容易失效,因此試劑盒的長期保存和長途運(yùn)輸將會(huì)受到很大的限制,容易因診斷試劑保存溫度不當(dāng)而使其敏感性下降甚至*失效,終導(dǎo)致疫病的檢測(cè)不及時(shí)而造成疫病流行。目前,針對(duì)核酸擴(kuò)增反應(yīng)試劑缺少能在4℃或室溫長期保存的方法。因而凍干法逐步應(yīng)用在熒光定量PCR試劑上。

冷凍干燥是把試劑預(yù)*行降溫凍結(jié)成固體,然后在真空條件下升華,將95%以 上的水分蒸發(fā)掉,而保護(hù)劑作為固劑在升華時(shí)不會(huì)崩塌,保證了凍干制品的形態(tài)。整個(gè)過程 在低溫中進(jìn)行,試劑活性不會(huì)受到影響。凍干試劑有著常溫穩(wěn)定、擺脫冷鏈、即時(shí)活化、不相容試劑共存、無交叉污染等很多明顯優(yōu)勢(shì),隨著產(chǎn)業(yè)的升級(jí),越來越多廠家嘗試開發(fā)凍干試劑。國內(nèi)對(duì)于凍干技術(shù)研究的累積相對(duì)較少,從學(xué)術(shù)到人才,都使得凍干技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中有較難逾越的壁壘。實(shí)際上絕大部分的試劑都可以做成凍干的,他的風(fēng)險(xiǎn)并不是試劑本身,而是錯(cuò)誤的方法和巨大的時(shí)間成本。

熒光定量PCR是可以實(shí)現(xiàn)凍干的。已經(jīng)有很多公司生產(chǎn)了凍干型PCR試劑,如犬細(xì)小病毒(CPV)核酸檢測(cè)試劑盒(凍干型/PCR-熒光探針法)、All-Ready 熒光定量RT-PCR試劑(凍干)、水痘RT-帶狀皰疹病毒野生株探針法熒光定量PCR試劑盒等。而國內(nèi)IVD企業(yè)廣東華銀醫(yī)藥科技有限公司推出全組份凍干的“xin型guan狀病毒2019-nCoV核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)。從目前來看基本上大部分診斷試劑都是可以通過凍干法獲得凍干試劑盒的。我公司提供凍干機(jī)和凍干技術(shù)支持,全力支持熒光定量PCR試劑的凍干項(xiàng)目。

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