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更新時(shí)間: 2024-11-15 21:00:08
期: 2024年11月15日--2025年5月15日
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細(xì)胞增殖的檢測(cè)對(duì)于評(píng)估細(xì)胞健康,確定遺傳毒性或評(píng)估抗癌藥物關(guān)重要。這通常是通過(guò)在復(fù)制過(guò)程中向細(xì)胞中加入[3H]胸苷或5-溴-2'-脫氧尿苷(BrdU)等核苷類(lèi)似物來(lái)進(jìn)行的,并通過(guò)放射自顯影或分別使用抗BrdU抗體檢測(cè)或觀(guān)察它們摻入DNA中的情況。 。兩種方法都有一些局限性。由于[3H]胸苷的放射性,因此很麻煩。放射自顯影很慢,因此不適合快速的高通量研究。BrdU染色的主要缺點(diǎn)是雙鏈DNA阻止了抗BrdU抗體進(jìn)入BrdU單元。

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baseclick EdU-Click測(cè)定法克服了這些限制,為BrdU和[3H]胸苷測(cè)定細(xì)胞增殖提供了更好的替代方法。EdU(5-乙炔基-2'-脫氧尿苷)是胸苷的核苷類(lèi)似物,在活性DNA合成過(guò)程中被摻入DNA中。與BrdU分析相比,EdU-Click分析不是基于抗體的,因此不需要DNA變性即可檢測(cè)摻入的核苷。

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Baseclick的PCR-Click標(biāo)記試劑盒包含通過(guò)基于點(diǎn)擊化學(xué)的便捷操作兩步法生成高度標(biāo)記的PCR產(chǎn)物所需的所有試劑。在三磷酸鹽混合物中,dTTP替換為C8-炔烴-dUTP或dCTP替換為C8-炔烴-dCTP。兩種混合物均可與優(yōu)化的Baseclick聚合酶一起用于標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)。所得的PCR產(chǎn)物包含炔部分,其在良性點(diǎn)擊反應(yīng)條件下以高度選擇性的方式與熒光染料,半抗原等的疊氮基衍生物反應(yīng)。可以通過(guò)點(diǎn)擊反應(yīng)中使用的疊氮化物標(biāo)記物的量來(lái)調(diào)節(jié)標(biāo)記物的摻入??梢赃_(dá)到高達(dá)20%或更高的標(biāo)簽率!

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