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Aobious  ELISA Kit FOR 1-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase gamma-1

貓號： E0269h

范圍：0.156-10 ng/mL

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摩爾濃度計算車®

如何訂購

$685.00

每 96 噸685.00美元

 

數量：

1.00

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更多信息

有可能的使用

該免疫測定試劑盒可用于體外定量測定人 1-磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸磷酸二酯酶 γ-1、血清、血漿、尿液、組織勻漿和細胞培養上清液和其他生物液體中的濃度。

測試原理

該試劑盒中提供的微量滴定板已預涂有 1-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase gamma-1 特異性抗體。然后將標準品或樣品添加到適當的微量滴定板孔中，并在每個微孔板中添加對 1-磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸磷酸二酯酶 γ-1 特異的偶聯多克隆抗體制劑和與辣根過氧化物酶 (HRP) 偶聯的抗蛋白并孵化。然后將 TMB 底物溶液添加到每個孔中。只有那些含有 1-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase gamma-1、偶聯抗體和酶偶聯抗蛋白的孔才會出現顏色變化。通過添加硫酸溶液終止酶-底物反應，并在 450 nm ± 2 nm 波長下用分光光度計測量顏色變化。然后通過將樣品的 OD 與標準曲線進行比較來確定樣品中的濃度。

材料和組件

試劑                                                                              數量

測定板 1

標準 2

樣品稀釋液 1 × 20ml

測定稀釋劑 A 1 × 10ml

測定稀釋劑 B 1 × 10ml

檢測試劑A 1×120μl

檢測試劑 B 1 × 120μl

洗滌緩沖液（25 x 濃縮液）1 × 30ml

底物 1 × 10ml

終止液 1 × 10ml

用于 96 孔的封板劑 5

說明 1

所需的其他用品

酶標儀

移液器和移液器吸頭

EP管

去離子水或蒸餾水

試劑盒的儲存

檢測板、標準品、檢測試劑 A 和檢測試劑 B 收到后應保存在 -20℃。收到試劑盒后，底物應始終保存在 4℃。其他試劑按照小瓶上的標簽保存。但要長期存放，請將整個試劑盒保持在-20℃。未使用的條帶應保存在密封袋中，并提供干燥劑，以盡量減少暴露在潮濕空氣中。試劑盒可在試劑盒的有效期內使用（自生產之日起六個月）。只要按照上述規定進行儲存，打開的檢測試劑盒將保持穩定直到所示的失效日期。

樣品收集和儲存

血清 - 使用血清分離管 (SST) 并讓樣品凝結 30 分鐘，然后以大約 1000 × g 的速度離心 15 分鐘。立即取出血清并進行檢測或分裝樣品并在-20℃或-80℃保存。

血漿 - 使用 EDTA 或肝素作為抗凝劑收集血漿。收集樣品 30 分鐘內，在 2℃ - 8℃ 下以 1000 × g 離心 15 分鐘。將樣品儲存在-20℃或-80℃。避免重復凍融循環。

尿液 - 無菌收集當天的第一次尿液（中游），直接排入無菌容器中。離心除去顆粒物，立即測定或等分并儲存在≤-20℃。避免重復凍融循環。

組織勻漿-組織勻漿 的制備將因組織類型而異。對于該測定，組織用 1X PBS 沖洗以去除多余的血液，在 20 mL 的 1X PBS 中勻漿，并在 ≤ -20℃ 下儲存過夜。 進行兩次凍融循環以破壞細胞膜后，將勻漿離心 5分鐘 5000 x g。立即取出上清液并進行測定或分裝并儲存在≤ -20℃。

細胞培養上清液和其他生物體液 - 通過離心去除微粒并立即測定或分裝樣品并在 -20℃ 或 -80℃ 下儲存。避免重復凍融循環。

筆記：

5天內用完的樣品可在2-8℃保存，否則樣品必須在-20℃（1個月）或-80℃（2個月）保存，以免失去生物活性和污染。

由于某些化學物質的影響，使用化學裂解緩沖液制備的組織或細胞提取樣品可能會導致意外的 ELISA 結果。

受細胞活力、細胞數量和采樣時間等因素的影響，試劑盒可能無法檢測到來自細胞培養上清液的樣本

樣品溶血會影響結果，因此溶血標本無法檢測。

進行測定時，將樣品緩慢帶到室溫。

不要使用經過熱處理的樣品。

程序的限制

AOBIOUS 只對試劑盒本身負責，不對檢測過程中消耗的樣品負責。用戶應計算整個測試中可能使用的樣本量。請提前預留足夠的樣品。

試劑盒不應超過試劑盒標簽上的有效期。

不要將試劑與其他批次或來源的試劑混合或替代。

如果樣品產生的值高于最高標準，則用樣品稀釋劑進一步稀釋樣品并重復測定。標準稀釋劑、操作員、移液技術、洗滌技術、孵育時間或溫度以及試劑盒使用時間的任何變化都可能導致結合的變化。

試劑制備

洗滌緩沖液 - 如果濃縮液中形成晶體，溫熱至室溫并輕輕混合直至晶體*溶解。將 30 mL 洗滌緩沖液濃縮液稀釋到去離子水或蒸餾水中，制備 750 mL 洗滌緩沖液。

標準品 - 用 1.0 mL 樣品稀釋劑重新配制標準品。這種重構產生 200 ng/mL 的儲備溶液。在進行連續稀釋之前，讓標準靜置至少 15 分鐘并輕輕攪拌（不允許直接在孔中進行連續稀釋）。未稀釋的標準品用作高標準品 (200 ng/mL)。樣品稀釋劑用作零標準 (0 ng/mL)。

ng/mL 200 100. 50.0 25.0 12.5 6.25 3.12 0

檢測試劑 A 和 B - 分別使用檢測稀釋劑 A 和 B (1:100) 稀釋至工作濃度。

測定程序

讓所有試劑達到室溫（請不要將試劑直接在37℃溶解）。所有試劑在移液前應通過輕輕旋轉*混合。避免起泡。 為 1 次實驗保留適當數量的條帶，并從微量滴定板上移除多余的條帶。取出的試紙條應重新密封并在 4℃ 下保存至試劑盒有效期。按照前幾節的指示準備所有試劑、工作標準和樣品。請在測定前預測濃度。如果這些值不在標準曲線的范圍內，用戶必須為其特定實驗確定最佳樣品稀釋度。

每孔加入 100 μl 標準品、空白或樣品。蓋上板封口機。37℃孵育2小時。

除去每孔的液體，不要洗滌。向每個孔中加入 100 μl 檢測試劑 A 工作溶液。蓋上板封口機。37℃孵育1小時。檢測試劑 工作溶液可能出現混濁。溫熱至室溫并輕輕混合直至溶液均勻。

吸出每個孔并清洗，重復該過程 3 次，共清洗 3 次。通過使用噴瓶、多通道移液器、歧管分配器或自動清洗器向每個孔填充清洗緩沖液（約 400 μl）進行清洗。在每個步驟中*去除液體對于良好的性能至關重要。最后一次洗滌后，通過吸出或傾析去除任何剩余的洗滌緩沖液。將板倒置并用干凈的紙巾吸干。

每孔加入 100 μl 檢測試劑 B 工作溶液。蓋上新的板封口機。37℃孵育1小時。

重復步驟 4 中的抽吸/洗滌。

向每個孔中加入 90 μl 底物溶液。蓋上新的板封口機。37℃孵育15-30分鐘。避光。

向每個孔中加入 50 μl 終止溶液。如果顏色變化不均勻，輕輕敲擊板以確保充分混合。

使用設置為 450 nm 的微孔板讀取器一次確定每個孔的光密度。

筆記：

吸光度是孵育時間的函數。因此，在開始檢測之前，建議在使用前新鮮制備所有試劑，并將所有需要的條孔固定在微量滴定框架中。這將確保每個移液步驟的經過時間相等，不會中斷。

請按照說明小心重新配制標準品或工作檢測試劑 A 和 B，避免起泡并輕輕混合直至晶體*溶解。重新配制的標準檢測試劑 A 和 B 只能使用一次。該測定需要小體積移液。為盡量減少移液引起的不精確，請確保已校準移液器。一次移液時，建議吸取 10μl 以上。

為了確保準確的結果，在孵育步驟中必須正確粘附封板劑。不要讓孔在孵育步驟之間長時間未覆蓋。一旦將試劑添加到孔條中，在檢測過程中的任何時候都不要讓條干燥。

對于程序中的每個步驟，將試劑添加到檢測板的總分配時間不應超過 10 分鐘。

為避免交叉污染，請在添加每個標準液、添加樣品和添加試劑之間更換移液器吸頭。此外，為每種試劑使用單獨的容器。

洗滌程序至關重要。洗滌不充分會導致精度差和吸光度讀數錯誤升高。

建議復制所有標準和樣品，盡管不是必需的。

底物溶液很容易被污染。請避光。

特異性

該檢測可識別重組和天然人 1-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase gamma-1。沒有觀察到明顯的交叉反應或干擾。

注：受限于現有技術和知識，我們不可能完成人類與所有類似物之間的交叉反應檢測，因此交叉反應可能仍然存在。

檢測 范圍

3.12-200 納克/毫升。

結果計算

平均每個標準、對照和樣品的重復讀數，并減去平均零標準光密度。通過使用能夠生成四參數邏輯 (4-PL) 曲線擬合的計算機軟件減少數據來創建標準曲線。作為替代方案，通過在 x 軸上繪制每個標準的平均吸光度與 y 軸上的濃度來構建標準曲線，并通過圖表上的點繪制最佳擬合曲線。可以通過繪制 1-磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸磷酸二酯酶 γ-1 濃度的對數對 OD 的對數對數據進行線性化，并且可以通過回歸分析確定最佳擬合線。建議使用一些相關的軟件來做這個計算，比如曲線專家1.3。此過程將產生適當但不太精確的數據擬合。如果樣品已被稀釋，則從標準曲線讀取的濃度必須乘以稀釋因子。

重要提示：

受限于現狀和科學技術，我們無法對供應商提供的原材料進行全面的鑒定和分析。因此使用該套件可能存在一些定性和技術風險

最終的實驗結果將與產品的有效性、終端用戶的操作技能和實驗環境密切相關。請確保有足夠的樣品可用。

不同批次的試劑盒在檢測范圍、靈敏度、顯色時間等方面可能略有差異。請嚴格按照試劑盒說明書進行實驗，本站電子版僅供參考。

第一次開板時，孔內可能會有一些霧狀物質。它不會對最終的化驗結果產生任何影響。

除非需要，否則不要從儲存袋中取出微量滴定板。

具有 10nm 或更小帶寬和 450nm 波長處 0-3 OD 或更大光密度范圍的微量滴定板讀數器可用于吸光度測量。

每次轉移時使用新的一次性移液器吸頭以避免污染。

不要將試劑從一個試劑盒批次替換到另一個試劑盒批次。僅使用制造商提供的試劑。

即使是同一個操作員，在兩個單獨的實驗中也可能得到不同的結果。為了獲得更好的重現性結果，應控制測定中每個步驟的操作。此外，建議在每批檢測前進行初步實驗。

每個試劑盒都經過嚴格的 QC 測試。但是，由于一些意外的運輸條件或不同的實驗室設備，最終用戶的結果可能與我們的內部數據不一致。來自不同批次的試劑盒之間的測定內差異也可能來自上述因素。

來自不同制造商的相同產品的套件可能會產生不同的結果，因為我們沒有將我們的產品與其他制造商進行比較。

有效期：六個月。

預防

建議用于該試劑盒的終止溶液是酸性溶液。使用此材料時，請佩戴眼部、手部、面部和衣物保護裝置。

典型數據

此圖表數據作為示例顯示。每次運行測定時都必須生成標準曲線。

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