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Brainbitsllc常見問題：

 

媒體

1. 混合 B27 補充劑 / Neurobasal 培養基 / 0.5 mM 谷氨酰胺后，培養基能穩定多久？

 

我們在 4 o C 的黑暗中儲存長達 6 個月。

 

2. 我需要多久補充一次 Neurobasal/B27/谷氨酰胺？

 

我們每 3 到 4 天更換 1/2 培養基，但這部分取決于細胞密度。參見 INVITROGEN (LTI) FOCUS 16:6。如果細胞密度高于 500/mm 2  ，則每 2 天更換 1/2。

 

3. 我可以用一些 B27/Neurobasal + 谷氨酰胺（無谷氨酸鹽）來稀釋 BrainBits 附帶的 B27/Neurobasal + 谷氨酰胺 + 谷氨酸鹽，比如 1:2 稀釋，細胞仍然生長嗎？

 

是的，但也不是。請參閱上面引用的 FOCUS 文章。

 

4. 您通常在培養第 4 天之前向 Neurobasal/B27 添加 25 uM 谷氨酸鹽。谷氨酸的目的是什么？

 

它幫助海馬神經元發芽并促進活力。

 

5. 不加谷氨酸有問題嗎？

 

在 4 DIV 時，您的存活率將降低約 30%。

 

6. 我需要一些培養基或試劑來維持培養物嗎？

 

您將需要您選擇的鍍膜玻璃或塑料基板。該訂單包括足夠的培養基來開始培養并維持 4 或 5 天。除此之外，您將需要更多培養基，我們可提供完整的即用型 NbActv1 配方，也可通過 Invitrogen 單獨購買。

 

7. 我應該用抗生素/抗真菌劑補充 B27/Neurobasal 培養基嗎？例如：pen/strep/fungizone 或慶大霉素？

 

我們通常在不使用抗菌抗生素和抗真菌劑的情況下進行培養，并取得了良好的效果。這具有三個優點：

 

首先，當出現污染時，更容易確定污染源。其次，如果您使用抗生素，當您感染時，就更難擺脫。第三，抗生素已被證明可以激活神經元中的癲癇樣爆發活動。然而，我們有時會在慶大霉素 (10 ug/ml) 中開始培養，并在細胞粘附后一小時后將其沖洗干凈。

 

休眠®

*Hibernate、Neurobasal 和 B27 僅用于研究目的，由 Invitrogen Corporation 制造。Hibernate、Neurobasal 和 B27 是 Invitrogen Corporation 的商標。

 

1. 我可以使用 Hibernate 進行木瓜蛋白酶治療嗎？

 

BrainBits LLC 提供 5 ml 不含 B27 的 Hibernate-Ca，用于在 15 ml 無菌離心管中最佳分離 BrainBits 與木瓜蛋白酶。加入木瓜蛋白酶 (Worthington) 后，在 37 o C 下溶解10 分鐘。您需要使用 0.2 µm 過濾器對溶液進行消毒。

 

2. 你是否總是在 Hibernate 中添加 B27 谷氨酰胺，或者它是否仍然在 Hibernate 中保持細胞存活？

 

幾乎總是。請參見 Brewer and Price (1996) PM:8856709 的圖 1 在 37 0 C 環境 CO2 中，Neurobasal/B27/gln 中的 LD50 為 24 小時，休眠/B27/gln 中為 >3 天。

 

3. 我們可以提供不含葡萄糖和丙酮酸的 Hibernate 嗎？

 

是的，事實上我們有幾個客戶提出了這個要求。因此，我們可以以相同的價格提供不含葡萄糖和丙酮酸的 Hibernate A。您只需要告訴我們您是希望用 NaCl 將滲透壓調整到正常水平還是低于平常水平，以便您可以自行調整。

 

4.  Hibernate 的其他用途包括：

 

轉基因小鼠基因分型過程中的大腦儲存

 

將腦組織運送給合作者

基質

1. 我不經常使用聚-D-賴氨酸。我制作了 5 毫克/毫升的 (100x) 儲備溶液并將其等分到小冷凍管中。我可以將原液冷凍保存多久，并且仍然可以與海馬細胞一起使用？

 

大概是永遠。不要儲存在聚丙烯管中。聚苯乙烯或 PET 更好。解凍時一定要攪拌均勻。

 

2. 一些研究人員使用聚乙烯亞胺代替聚賴氨酸。一個比另一個有優勢嗎？

 

PEI 比聚賴氨酸便宜。我們使用 PEI 并沒有取得多大成功，但 Mark Mattson 在開始在 Neurobasal/10% 血清中培養后一直使用它。報告表明神經元存活率或尖峰率沒有顯著差異。

 

Soussou WV、Yoon GJ、Brinton RD、Berger TW (2007) 在表面處理的多電極陣列上培養的海馬神經元的神經元網絡形態和電生理學。IEEE 跨生物醫學工程 54：1309-1320。 電話：17605362

 

Brewer GJ, Cotman CW (1989) 海馬神經元在低密度限定培養基中的存活和生長：夾心培養技術或低氧的優勢。大腦研究 494:65-74。電話：2765923

 

3.  BrainBits 神經元越來越多地生長為細胞簇或團塊，而不是孤立的。怎么了？

 

這意味著細胞與自身的粘附比與基底更緊密。最可能的問題是基材準備不充分。將您的方案與推薦的聚賴氨酸制備和基材涂層進行比較。

 

4. 關于聚-L-賴氨酸與聚-D-賴氨酸，我假設使用聚-D-賴氨酸，因為如果它分解成賴氨酸，細胞就不能使用d賴氨酸。有什么道理嗎？

 

這就是理論。在一些早期研究 (Brain Res. 494:65(1989)) 中，我們發現差別不大。

 

 

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