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動塑料DNA（kDNA）

SKU 尺寸       價錢       數量      

TG2013-1      25微克   15.00          

TG2013-2      50微克   2.00            

TG2013-3      250微克 3.00            

 

kDNA產品說明

kDNA是拓撲異構酶II分析的理想底物，因為它對II型反應機制具有特異性。研究人員甚可以在存在大量過量的拓撲異構酶I的情況下檢測II型酶。因此，kDNA可以很好地量化粗細胞提取物中的II型活性，而粗提物中經常富含拓撲異構酶I。kDNA底物在人類中的表現異常出色前2a和b以及原核生物酶，例如DNA促旋酶或拓撲異構酶IV。該底物與我們的Topo II分析試劑盒，Topo II藥物試劑盒和旋回酶分析試劑盒包裝在一起。

 

由于部分純化的部分中存在topo I，因此基于超螺旋DNA松弛而采用粗提物進行topo II活性的測定可能會很復雜。由于污染核酸酶活性（由于Mg ++），會引起額外的復雜性，這會降解或切割超螺旋底物。通過使用從昆蟲錐蟲Crisidia fasciculata的運動塑料中制備的鏈狀DNA底物，可以避免這些問題。動塑料DNA（kDNA）是互鎖的DNA小環（大多數為2.5 kb）的聚集體，形成了非常大的高分子量網絡。結果，這些網絡無法進入瓊脂糖凝膠。孵育后 與DNA參與雙鏈斷裂和團聚循環的topo II，有效釋放了微環狀DNA。由于它們的小尺寸，已分離的微型圓迅速移入凝膠。拓撲異構酶I不會發生此反應。反應產物可能如下變化：

 

質量控制測試：

 

對于連接的KDNA底物，少90％的DNA將保留在1％瓊脂糖凝膠的孔中。

 

用純化的拓撲異構酶II測試每批Kinetoplast DNA的變性。

儲存緩沖液：

kDNA以產品的濃度儲存在10 mM Tris-Cl（pH 7.5）和1 mM EDTA中。

 

評論和引用：

 

菲利普斯·JW，格茨·馬薩諸塞州，史密斯·SK，辛克·DL，波蘭克·J，奧尼西·R，薩洛·S，威爾西·J，阿洛科·J，西格蒙德·J，多爾索·K，李·S，Skwish S，德拉克魯茲M，馬丁·J，維森特Genilloud O，Lu J，畫家RE，Young K，Overbye K，Donald RGK，Singh SB：發現Kibdelomycin，這是一種通過金黃色葡萄球菌的化學基因分析方法開發的新型新型II型細菌異構酶抑制劑。  細胞化學與生物學 2011，18：955-965。doi：10.1016 / j.chembiol.2011.06.011。

 

運輸和存放說明：

kDNA應儲存在4°C下；但是，可以在-20°C下長期保存。DNA通常在環境溫度下運輸。

 

人Topoisomerase II分析試劑盒產品描述

 

該試劑盒旨在進行快速，特異性的II型真核DNA拓撲異構酶測定。該試劑盒可促進II型酶的純化和鑒定，并包含II型拓撲異構酶常規檢測所需的所有試劑。該測定基于動塑料 DNA（kDNA），并且由于它對II型活性（而非I型）具有特異性，因此可以用粗細胞提取物進行。反應產物使用由TopoGEN開發的新型凝膠系統解析，該系統可以極其快速且明確地檢測拓撲異構酶II的活性。包括適當的緩沖液，DNA底物和DNA標記。Human Top2a包含在目錄號中以-A表示的套件中。包含拓撲異構酶II脫鏈和線性DNA標記，可以清晰，輕松地識別用戶定義的提取物或級分中的topo II活性。該測定試劑盒還可以與純化的酶（由TopoGEN提供）結合使用，以檢測topo II的抑制劑。kDNA分析將檢測刺激topo II切割DNA的毒物以及僅抑制催化活性的物質。

 

人拓撲異構酶II檢測試劑盒內容（用于100個檢測試劑盒大?。?/p>

 

-100單位人類Top2a酶（目錄號TG1001-1A提供）-動

塑料DNA（kDNA）20

ug-凝膠上樣緩沖液中的

標記線性kDNA- 標記不連續的kDNA（經

Topo II處理）-10X Topoisomerase II測定緩沖液*

--5X終止緩沖液/凝膠加載染料-

詳細說明手冊

 

*為了提高穩定性，提供了10x Topo II Assay緩沖液作為兩個成分：緩沖液A（無ATP）和緩沖液B（ATP）。每次通過組合緩沖液A和B制成新鮮的10x分析緩沖液。

 

使用人類拓撲異構酶II檢測試劑盒滴定Topo II活性

 

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