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甲基化特定的MLPA

甲基化特異性（MS）-MLPA ®是的變體MLPA技術。使用MS-MLPA，可以同時對多個目標的甲基化進行半定量分析。

MS-MLPA探針

像常規(guī)MLPA探針混合物一樣，MS-MLPA探針混合物包含靶向特定基因組序列的探針。每個探針均由兩部分組成：左探針寡核苷酸和右探針寡核苷酸（LPO和RPO）。MS-MLPA探針混合物中的某些探針靶向包含甲基化敏感性HhaI核酸內切酶限制性位點的區(qū)域。這些探針可用于甲基化分析。

MS-MLPA的原理

探針與樣品DNA上的靶序列雜交。然后將HhaI酶用于消化未甲基化的雙鏈探針-DNA復合物。

與未甲基化的樣品DNA的復合物被消化。消化的探針無法按指數(shù)擴增，因此不會產生信號。具有甲基化樣品DNA的復合物不會被HhaI消化，并會產生正常信號。

MS-MLPA反應

對于MS-MLPA的步驟是高度相似的概述的MLPA。重要的區(qū)別是過夜雜交后，該反應分為未消化和消化的反應。

未消化的反應用于確定拷貝數(shù)。在用于甲基化分析的消化反應中，HhaI酶與Ligase-65酶同時添加。

數(shù)據(jù)分析

Coffalyser用于分析數(shù)據(jù)。使用與常規(guī)MLPA相同的未消化反應確定拷貝數(shù)。通過將消化反應中的每個探針信號與未消化反應中的相應信號進行比較，可以確定DNA樣品中的甲基化百分比。

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