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特色新產品

概述

翻譯后乙酰化發生在賴氨酸殘基的ε-氨基上，作為一種可逆且高度動態的PTM，已知其是多種細胞事件的關鍵調節因子，包括染色質結構、轉錄、代謝、信號轉導和細胞骨架調節。

主要功能

首乙酰賴氨酸研究者的優化試劑盒

分析細胞或組織樣品中內源性或轉染蛋白的乙酰化

最完整的乙酰化蛋白質圖譜

化學計量分析帶來更深入的機理見解

查看備受關注的Signal™Seeker工具箱的新增內容（如下）

新格式-信號導引頭乙酰賴氨酸檢測試劑盒（目錄號BK163-S.15測定）

新格式-信號導引頭乙酰賴氨酸檢測試劑盒（目錄號BK163，30個測定）

新-信號導引頭乙酰賴氨酸檢測試劑盒-AAC03（目錄號BK164，30個測定）

新格式-乙酰賴氨酸親和珠（AAC0

乙酰賴氨酸親和珠-AAC04

乙酰賴氨酸親和珠（40次測定）

當使用乙酰賴氨酸親和珠時，這種新的通用形式可以進行更精確的控制

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作為Signal Seeker™產品線的一部分，AAC04乙酰賴氨酸親和珠經過優化，可檢測賴氨酸乙酰化蛋白的內源性水平。乙酰賴氨酸親和珠的新的、通用的形式被提供為已經與G蛋白珠化學綴合的AAC02珠（克隆7B5A1）和AAC03珠（克隆10C4B2.1）。這些珠子可以在1:1的混合物中組合以生產AAC04珠子，并且新的形式在研究乙酰賴氨酸PTMs時提供了很大的靈活性和準確性。驗證研究表明，這些珠子可以免疫沉淀廣泛的賴氨酸乙酰化蛋白，在IP測定中，重鏈或輕鏈的可檢測浸出量最小。還提供了一種全面的Signal Seeker™乙酰賴氨酸檢測試劑盒（BK163），建議首使用。

驗證數據：乙酰賴氨酸親和珠白書

每批親和珠都經過質量控制，以提供高批次間的一致性，請參閱COA文件。

已驗證的應用程序

應用1：使用AAC02珠、AAC03珠或組合珠（AAC04珠）進行總乙酰賴氨酸圖譜的免疫沉淀檢測——新的AAC04珠格式可以實現所有3種選擇

使用AAC02珠、AAC03珠和AAC04珠（50µl珠漿）對用脫乙酰酶抑制劑[TSA（1µM）和煙胺（1mM）]處理（+）或未處理（-）的Cos-7細胞的乙酰化蛋白進行IP處理6小時。用AAC03-HRP抗體（1:3000）洗脫并通過蛋白質印跡分析富集的乙酰化蛋白的總圖譜。使用小鼠IgG珠作為非特異性結合的對照（Cat#CIG02）。每個IP測定使用1 mg Cos-7裂解物。

應用2：使用AAC02珠粒、AAC03珠粒或組合珠粒（AAC04珠粒）免疫沉淀靶特異性乙酰化蛋白——所有3種選擇都可以使用新的AAC04珠體形式

AAC03珠粒和AAC02珠粒（50µl珠漿）和1:1混合物（各25µl）AAC04珠粒用于脫乙酰酶抑制劑[TSA（1µM）和煙胺（1mM）]處理（+）或未處理（-）的Cos-7細胞的乙酰化蛋白IP 6小時。使用抗EGFR和抗RhoGDI抗體進行蛋白質印跡分析，并使用LiCor-Empiria軟件對信號進行定量。還進行IP測定，并對小鼠IgG對照珠的信號進行定量（印跡未顯示）。每個IP使用1 mg裂解物。

應用3：從組織樣品中免疫沉淀乙酰化蛋白

用BlastR緩沖液獲得小鼠組織提取物（肝臟和心臟）。在1mg組織提取物中使用AAC04珠粒（60μg）或mIgG對照珠粒（#CIG02，60µg）進行IP。用SDS-PAGE分離富集的蛋白質，并用AAC03-HRP（1:3000）進行蛋白質印跡分析。

bk163_問題

使用AAC04親和珠、細胞信號乙酰賴氨酸抗體和免疫化學乙酰賴氨肽親和珠富集總乙酰賴氨蛋白

使用各種乙酰賴氨酸親和試劑來IP來自用TSA（1μM）和煙胺（1mM）處理（+）或未處理（-）6小時的Cos-7細胞的乙酰化蛋白。（1） 16.7 ml AAC04珠漿（20μg抗體）。（2） 50ml AAC04珠漿（60μg抗體）。（3） 抗乙酰賴氨酸兔單克隆混合物（細胞信號，按照制造商說明1:100）。（4） ImmuneChem乙酰賴氨酸親和珠（40μg抗體）。（5） ImmunChem乙酰賴氨酸

Signal Seeker®乙酰賴氨酸檢測試劑盒-AAC03珠子（30次測定）

信號導引頭乙酰化檢測試劑盒-AAC03珠（30次測定，免疫沉淀形式）

藥/包裝

細節

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Signal Seeker™生產線的開發允許專家和非專家對關鍵的調節蛋白修飾進行簡單分析。全面的Signal Seeker™試劑盒提供了一個親和珠系統，用于從任何給定的細胞或組織裂解物中分離和富集修飾蛋白。然后使用靶蛋白的一級抗體通過標準的蛋白質印跡程序分析富集的蛋白質群體。

Cytoskeley提供兩種乙酰賴氨酸檢測試劑盒，BK163和BK164。BK163是通用的試劑盒，因為它包含兩種類型的乙酰賴氨酸親和珠，AAC02珠（克隆7B5A1）和AAC03珠（克隆10C4B2.1），它們已與G蛋白珠化學偶聯。這些珠子可以以1:1的混合物組合以生產AAC04珠子，并且這種形式在研究乙酰賴氨酸PTM時提供了很大的靈活性和精度。驗證研究表明，這些珠子可以免疫沉淀

產品用途包括

調查瞬態調節機制

測量多途徑成員蛋白的信號事件

發現感興趣的蛋白質的新修飾

深入了解監管機制

測量內源性或瞬時表達的蛋白質信號事件

這些套件有許多應用程序，我們在這里介紹了概述和有趣的示例：

Signal Seeker®試劑盒BK164僅使用AAC03親和珠，如果已確定AAC03比替代乙酰賴氨酸親和珠Cat#AAC02對POI的富集更好，則應使用該試劑盒。

應用1顯示了表皮生長因子受體（EGFR）和RhoGDI的IP。在該實施例中，如果研究EGFR或RhoGDI乙酰化，則建議單獨使用AAC03珠。AAC03珠粒已被證明對廣泛的乙酰化蛋白具有非常強的富集作用（見申請2）。

當檢查新的乙酰化狀態時

應用2：目標和總乙酰化剖面的測定

使用來自試劑盒BK164的乙酰裂解物親和珠（AAC03珠）從1mg Cos-7細胞裂解物中免疫沉淀（IP）內源性乙酰化蛋白。使用HRP標記的泛抗乙酰基抗體（試劑盒BK164中提供），通過蛋白質印跡檢測來分析IP的目的蛋白（POI）、EGFR和RhoGDI，或總乙酰基體。用HDAC抑制劑TSA（1uM）和煙胺（1mM）處理（+）或未處理（-）賴氨酸6小時。

試劑盒內容

乙酰賴氨酸試劑盒包含以下成分：

裂解和蛋白質定量步驟IP和預澄清步驟洗滌步驟洗脫步驟西方步驟

BlastR™裂解緩沖液

BlastR™稀釋緩沖液

BlastR™過濾器

蛋白酶抑制劑雞尾酒

HDAC抑制劑雞尾酒

Precision Red™蛋白質測定試劑

乙酰賴氨酸親和珠（AAC03珠）

IP控制珠

BlastR™沖洗緩沖液

旋轉柱

珠子洗脫緩沖液

化學發光試劑A

化學發光試劑B

抗乙酰賴氨酸HRP抗體

在這一研究領域可以嘗試的其他實驗包括：

•參與靶蛋白調節的乙酰化酶和HDAC酶的藥理學研究。

•研究在各種不同生長因子或藥物治療下的乙酰化作用。

•檢查乙酰化靶蛋白與其下游效應物的相互作用。

•檢查乙酰化和其他靶蛋白的PTM之間的串擾。

 

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