供貨周期 |
一周 |
應(yīng)用領(lǐng)域 |
醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
細胞增殖是指細胞在周期調(diào)控因子的作用下,通過DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成等復(fù)雜反應(yīng)而進行的分裂系列過程。其中核DNA的復(fù)制倍增是整個過程的重要特征。細胞增殖檢測技術(shù)廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)遺傳學(xué)腫瘤生物學(xué)免疫學(xué)藥理和藥代動力學(xué)等研究領(lǐng)域。
質(zhì)譜流式細胞技術(shù)服務(wù)的質(zhì)譜流式細胞技術(shù)(mass cytometry,MC)就是將ICP-MS應(yīng)用到單個細胞的分析,原理是用純化的單元素同位素標記抗體,然后使用ICP-MS檢測該元素離子峰。操作流程簡單,如圖1所示,首先細胞用帶有金屬元素(一般是鑭系金屬)的特異性抗體標記3-4,然后被送入質(zhì)譜流式細胞儀,細胞以單個細胞液滴狀態(tài)被霧化后進入高溫等離子體,產(chǎn)生自由原子,四級桿選擇只通過鑭系金屬質(zhì)量范圍內(nèi)的離子,去除其余離子,利用飛行時間質(zhì)譜(TOF mass spectrometry)檢測鑭系金屬離子的相對信號強度。
傳統(tǒng)流式細胞術(shù)用熒光基團作為報告分子,通過對發(fā)射光強度定量以確定目標分子的表達量,但熒光基團發(fā)射譜常有重合,尤其是在同一個實驗中進行多參數(shù)測量的情況下,難以區(qū)分多個熒光基團。質(zhì)譜流式細胞技術(shù)使用單一分子量的穩(wěn)定鑭系金屬代替熒光基團作為報告分子,元素質(zhì)譜分析儀能夠通過分子量準確區(qū)分不同原子質(zhì)量,并且不同鑭系金屬質(zhì)量沒有信號重疊,增加了定量的準確性。
目前,質(zhì)譜流式細胞技術(shù)可以同時對51個靶蛋白進行檢測,每秒檢測1000個細胞,平均每天可檢測100個樣品,檢測限為100個拷貝分子,已經(jīng)過驗證的鑭系金屬標記抗體種類超過400種;除常規(guī)蛋白外,質(zhì)譜流式細胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾1,蛋白降解產(chǎn)物5,檢測細胞存活率,細胞大小,mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量6,DNA合成速率7以及蛋白酶活性8等的測定。
多路質(zhì)譜流式細胞技術(shù)
正如蛋白質(zhì)組學(xué)中的非標記定量,質(zhì)譜流式細胞技術(shù)對靶點的定量準確性也受到不同儀器離子化效率的差異、儀器狀態(tài)等的影響;同時,傳統(tǒng)的質(zhì)譜流式細胞技術(shù)每次只能檢測一個樣品,通量較低。因此,質(zhì)量標簽細胞條碼技術(shù)(mass-tag cellular barcoding,MCB)應(yīng)運而生。
細胞經(jīng)過藥物等處理后,用多聚甲醛固定后,使用MCB試劑對不同樣本的細胞進行條形碼標記,然后將不同樣本混合后進行常規(guī)質(zhì)譜流式細胞分析前處理和檢測。最終通過檢測條形碼對應(yīng)的元素離子,對細胞進行樣品歸類。