FITC標記多糖(葡聚糖 聚蔗糖 菊糖 )

FITC葡聚糖
FITC-DEAE-葡聚糖(FDD)
FITC-羧甲基-葡聚糖（FCM-葡聚糖）
FITC-聚蔗糖(FITC-Ficoll^®)
FITC-DEAE-聚蔗糖
FITC-CM-聚蔗糖(FITC-CM-Ficoll^®)
FITC-菊糖
熒光素透明質酸(FHA-Se)
TRITC標記多糖
TRITC-聚蔗糖(TRITC-Ficoll^®)
四甲基羅丹明透明質酸(TR-HA)
 

產品一：FITC葡聚糖-熒光素異硫氰酸酯葡聚糖

化學名：

葡聚糖(3´,6´-二羥基-3-氧代螺(異苯并呋喃--1(3H),9´-[9H]占噸]-5(或6)-基)氨基硫代甲酸酯
熒光素異硫氰酸酯 - 葡聚糖
熒光素基硫代氨基甲?；?- 葡聚糖

CAS號：60842-46-8

結構

定義
MW：重均分子量
Mn：數均分子量
DS：定義為多糖鏈中每個糖分子上取代分子的數目

特性

用熒光素對基于天然葡聚糖B512F所制備的特選葡聚糖組分進行標記，標記時采用穩定的硫代氨基甲酰鍵連接基團，標記步驟不會導致葡聚糖發生任何降解¹，FITC-葡聚糖的DS范圍為0.002-0.008，在該取代低水平范圍內，反應對葡聚糖本身所帶來的變化被盡可能地減少了。這一點對滲透性研究而言非常重要。

FITC-葡聚糖以黃色/橙色粉末形式供應，其在水中可以自由溶解，也可以黃色溶液形態的鹽溶液形式供應。該產品也可溶于DMSO、甲酰胺等某些極性有機溶劑，但不溶于低級脂肪醇、丙酮、Chloroform,CHCl3、二甲基甲酰胺?？梢酝ㄟ^在劇烈攪拌下將粉末緩慢加入到溫水（約60℃）中來實現高分子量組分的溶解。

分子量大于5 000道爾頓的葡聚糖分子在溶液中表現為柔性線團型（coil）鏈段。表1（下表）顯示了不同分子量分子的尺寸。葡聚糖和FITC-葡聚糖呈現牛頓流動特性，即粘度與剪切速率無關。

表1.葡聚糖的分子尺寸。

光譜數據

圖1. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（10mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，FITC-葡聚糖70的熒光掃描光譜。激發波長：495nm；發射波長：520 nm。

圖2.FITC-葡聚糖在pH 4-9范圍內的熒光光譜（發射波長：520nm）

儲存和穩定性

FITC-葡聚糖在體外和體內的穩定性都非常好——只有在高pH（> 9）和高溫下，熒光素標記才有發生水解的風險。在37°C的兔血漿、肌勻漿、肝勻漿和尿液研究中，FITC-葡聚糖的穩定期均不短于3天，Mw無任何變化，熒光素組分釋放不可見。 在6％的TCA中，FITC-葡聚糖可以在室溫下穩定3天²。高壓滅菌的FITC-葡聚糖70溶液可以在8至50℃下儲存長達5個月，只有50℃樣品中的游離氨基-熒光素含量出現略微增加（1％）。FITC-葡聚糖在pH4下保持穩定，但在pH9下，其熒光強度會在35℃、1個月內出現相當大的下降（24％）。數項研究³均證實了在實驗（1-6天）期間FITC-葡聚糖的體內穩定性。

FITC-葡聚糖的應用

FITC-葡聚糖主要用于細胞和組織中的滲透性和運輸研究，但也可用于其他材料（過濾器、凝膠等）的滲透性研究。其有一點*優勢在于通過測量熒光，可以提供健康或患病組織的實時滲透性定量數據?；铙w熒光顯微鏡具有高靈敏度，即使組織液中的熒光濃度低至1μg/ ml也可以檢測得到。人們已經開發了數個模型來方便實時研究^4,5，FITC-葡聚糖也可用作細胞中的pH探針^6,7。人們在偏振實驗中還發現，激發態的壽命與共軛之前的壽命差不多。

FITC-葡聚糖在以下研究領域都已表現出了自身價值（我們從各個主題的眾多文章中挑選出來的參考文獻）：

1. 腸道組織滲透性研究^8-10
2. 腦和神經系統滲透性研究^11-13
3. 腫瘤組織滲透性研究^14-16
4. 眼內滲透性研究^17-19
5. 腎組織滲透性研究²⁰

圖3. 注入FITC-葡聚糖150后的頰囊圖像。第二張圖像顯示了注入組胺后微血管出現的滲漏。 （已獲得E.Svensjö許可）。

供應商：西安凱新生物科技有限公司

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產品二：FITC-DEAE-葡聚糖（FDD）

化學名：

FITC二乙基氨基乙基葡聚糖

熒光素-硫代氨基甲?；?(O-2-二乙基氨基乙基)-葡聚糖

CAS號：無

結構

特性

FITC-DEAE-葡聚糖以易溶于水或電解質溶液的黃色粉末形式供應。其溶解速率取決于顆粒大小和結構，我們建議您在劇烈攪拌下緩慢加入粉末 – 如果產品分子量比較高，可以加熱水。 DS（FITC）在0.001-0.008之間，氮含量的范圍是3-5％ - 相當于每三個葡萄糖單位上約有一個DEAE取代基。我們通過合成在葡聚糖鏈中引入兩種類型的DEAE-取代基（參見上面的結構圖）。主要取代基是單一的叔胺基團，但其在高DS下會進一步發生反應，生成含有季胺以及叔胺的“串聯”基團。

光譜數據

圖4. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（10mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，FITC-DEAE-葡聚糖的熒光掃描光譜。激發波長：495nm；發射波長：520 nm。

儲存和穩定性

將粉末遮光、儲存在密封良好的容器中，可以在室溫下穩定保存三年以上。FITC-DEAE-葡聚糖不應在pH> 8的溶液條件下長期保存。

FITC-DEAE-葡聚糖的應用

FITC-DEAE-葡聚糖具有母體DEAE-葡聚糖的眾多特性，同時還具有熒光性以及可追蹤性。 DEAE-葡聚糖的部分應用如下：

• 作為疫苗的佐劑
• 增強細胞對蛋白質和核酸的攝入量 - 轉染技術和病毒感染性
• 穩定蛋白質（酶）

在利用穿孔素來研究有核細胞攝入帶正電的分子的實驗中，人們已經用到了FITC-DEAE-葡聚糖²¹。在吸收促進劑的某項研究中，人們比較了FITC-DEAE-葡聚糖、FITC-葡聚糖和FITC-葡聚糖硫酸鹽通過鼻粘膜的滲透性²²。

產品三：FITC-羧甲基 - 葡聚糖（FCM-葡聚糖）

化學稱：

FITC羧甲基葡聚糖
熒光素-硫代氨基甲酰基-(O-羧甲基)-葡聚糖

CAS號：無

結構

特性

FITC-CM-葡聚糖是通過特選葡聚糖部分與活化羧甲基衍生物在堿中發生反應而制得的，該過程在葡聚糖鏈上引入了O-羧甲基。羧基含量約為5％，相當于每5個葡萄糖單位上約有1個CM基團。此后，通過與異硫氰酸熒光素反應引入熒光素基團。 DS（FITC）介于0.003 - 0.008之間。 FITC-CM-葡聚糖以易溶于水或電解質溶液的黃色粉末形式供應。由于分子上帶有負電荷羧基，產物具有明顯的聚陰離子特征。FITC-CM-葡聚糖的溶液性質估計與CM-葡聚糖^23-25的溶液性質相當。在中性溶液中，羧甲基取代基將相互排斥，導致葡聚糖線團型（coil）鏈段伸展。 FITC-CM-葡聚糖不溶于大多數有機溶劑，例如乙醇、甲醇、丙酮、Chloroform,CHCl3、乙酸乙酯。

光譜數據

圖5. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（10mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，FITC-CM-葡聚糖的熒光掃描光譜。激發波長：493nm；發射波長：519 nm。

儲存和穩定性

相關的前瞻性穩定性研究已經證實：CM-葡聚糖的效力和純度可以保存至少3年（該研究尚未發表），根據我們使用FITC-葡聚糖的經驗，我們預測FITC-CM-葡聚糖具有類似的穩定性。我們建議將FITC-CM-葡聚糖儲存在室溫、黑暗、密封容器中。

FITC羧甲基葡聚糖應用

CM-葡聚糖本身既具有生物相容性，被用作數種制藥和診斷應用中的原材料。同樣，FITC-CM-葡聚糖的毒性應該也很低。在葡聚糖鏈中插入羧基可以為將令人感興趣的生物活性分子（藥物、酶、診斷示蹤劑）固定在葡聚糖上提供了進一步的機會。羧基部分可用于眾多反應，例如酯化，以及與胺、UGI或Passerini反應。簡單的離子結合反應也可以提供一系列結合了不同陽離子分子的衍生物^26,27。羧基還會使得分子整體帶上負電荷，對于獲取細胞膜和組織的滲透性信息可能比較有價值²⁹。FITC-CM-葡聚糖在藥物遞送系統研究中的應用已有相關報道²⁹。

產品四：FITC-聚蔗糖（FITC-Ficoll^®）

化學名：

聚蔗糖(3´,6´二羥基-3-氧代螺(異苯并呋喃-1(3H),9´-[9H]占噸]-5(或6)-基)氨基硫代甲酸酯]
熒光素異硫氰酸酯 - 聚蔗糖

CAS號：無

結構

特性

采用類似于de Belder和Granath¹所述的方法，用熒光素對聚蔗糖組分進行標記。通過穩定的硫代氨基甲酰基鍵連接基團與熒光素部分進行連接，標記步驟不會導致聚蔗糖發生任何降解。 FITC-polysucroses的DS在0.001-0.008之間，在該低水平范圍內，反應對聚蔗糖本身所帶來的變化被盡可能地減少了。

FITC-聚蔗糖以黃色粉末形式供應，其在水或鹽溶液中可以自由溶解，得到黃色溶液。該產品也溶于DMSO、甲酰胺等某些極性有機溶劑，但不溶于低脂肪醇、丙酮、Chloroform,CHCl3、二甲基甲酰胺。

聚蔗糖分子在溶液中顯示為球形分子，和結構預期結果一樣。在表2（下表）中，我們比較了葡聚糖和聚蔗糖組分的Stokes半徑，該數據反映了分子靈活性之間的差異。該分子可視作介于堅硬的固體圓球和柔性線團型鏈端之間的中間體。因此，在比較具有相似分子量的聚蔗糖和葡聚糖組分時，聚蔗糖的分子尺寸會小一些。與具有相同濃度的蔗糖溶液相比，聚蔗糖溶液具有非常低的滲透壓。例如，10％的聚蔗糖70溶液的滲透壓為3mOs / kg，而10％蔗糖的滲透壓為150。

目前還沒有任何關于FITC-聚蔗糖詳細毒性研究的報道。然而，在對實驗動物靜脈內施用12g / kg的聚蔗糖組分（100000-500000）后，未表現出任何毒性癥狀。聚蔗糖與細胞、病毒、微生物等之間具有良好的生物相容性，在細胞分離技術中已經應用了數十年。

表2. 聚蔗糖和葡聚糖的分子尺寸比較

光譜數據

圖6. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（9.9mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，FITC-聚蔗糖70的熒光掃描光譜。激發波長：496nm；發射波長：525 nm。在生物介質中進行測量可能會顯著影響熒光強度，其有可能會增強，也有可能會減弱。

儲存和穩定性

在室溫、氣密容器中，FITC-聚蔗糖粉至少可以穩定儲存6年。關于FITC-聚葡萄糖在溶液中的穩定性尚未有任何詳細研究報道。然而，熒光素部分和聚蔗糖之間的硫代氨基甲?；B接基團的穩定性類似于葡聚糖上連接基團（參見FITC-葡聚糖）的穩定性。 FITC-葡聚糖在高35℃的溫度、pH 4下可以保持穩定長達1個月，但由于蔗糖中糖苷鍵具有不穩定性，所以不推薦將該方案用于聚蔗糖基產品。聚蔗糖本身可以在中性和弱堿性pH下高壓滅菌。

FITC-聚蔗糖的應用：

關于兩種多糖（聚蔗糖（Ficoll^®）和葡聚糖）在評估腎小球選擇性中與腎小球蛋白對比的可用數據已有綜述發表³⁰。多分散多糖是測量腎小球選擇滲透性的優良探針，其具有可重現性、可靠性和性。作者闡述了可能會對結果產生影響的各種特性，如分子大小、形狀、電荷和靈活性，并評估它們在各種孔隙模型中的結果。靜脈輸注Ficoll腎小球滲透性的研究表明，其滲透性下限值在50Å左右，而葡聚糖預計值在60-70 Å，這一點可以由葡聚糖靈活性更大來解釋。人們還通過研究FITC-聚蔗糖在缺乏內皮細胞膜的小鼠中的清除率來闡明大分子運輸途徑³¹。還使用FITC-聚蔗糖70和400（即FITC-菊糖）³²來在不同的腎小球濾過率下研究腎小球濾過作用。

對葡聚糖和Ficoll腎小球濾過作用的研究顯示，相比于葡聚糖，腎小球膜對Ficoll表現出更多的限制性屏障作用³³。有趣的是，Ficoll篩分系數的值接近于不帶電球狀蛋白質的報道值。用FITC-聚蔗糖70/400監測手術和肌肉創傷后大鼠的腎小球篩分系數³⁴。用FITC-聚蔗糖400（960μg）、FITC-聚蔗糖70（40μg）和FITC-菊糖（500μg）混合物作為初次推注給藥給大鼠。使用FITC-聚蔗糖70/400在小窩蛋白-1敲除小鼠中研究腎小球滲透性³⁵。

通過對大鼠輸注FITC-聚蔗糖70和白蛋白來觀察溫度和氯化銨對清除率的影響。聚蔗糖的表現與葡聚糖不同，在20-70 Å范圍內較低^36,37。使用FITC-聚蔗糖70來評價糖尿病9周后天然白蛋白清除率的增加是由于電荷選擇性降低還是大孔徑比例的變化而導致的³⁸。

產品五：FITC-DEAE-聚蔗糖

化學名：

Fluoresceinyl-thiocarbamoyl-(O-diethylaminoethyl)-polysucrose
熒光素基-硫代氨基甲?；?(O-二乙基氨基乙基)-聚蔗糖

CAS號：無

結構

特性

FITC-DEAE-聚蔗糖以易溶于水或緩沖溶液的黃色粉末形式供應，大約每五個己糖基團上有一個DEAE基團。 FITC取代度在0.001至0.008之間。該產品具有聚陽離子特性。如以上結構表示中所描繪的一樣，DEAE-取代基可以作為單個單元或作為“串聯”單元存在，后者含有季銨結構。

光譜數據

激發在493nm下進行，而熒光測量在523nm處進行（見圖7）。在生物介質中進行測量可能會顯著影響熒光強度，其有可能會增強，也有可能會減弱。

圖7. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（10mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，FITC-DEAE-聚蔗糖的熒光掃描光譜。激發波長：496nm；發射波長：530 nm。在生物介質中進行測量可能會顯著影響熒光強度，其有可能會增強，也有可能會減弱。

儲存和穩定性

FITC-DEAE-聚蔗糖以黃色干燥粉末形式供應，儲存在黑暗、室溫、密封良好的容器中。交貨時產品的pH值為6.5 - 7.0，不應低于5，產品不得長期存放在pH> 7.0的條件下。

FITC-DEAE-聚蔗糖應用

該產品可以用于研究聚陽離子聚合物的滲透性，并與器官、組織和細胞中的中性聚合物進行比較。

產品六:FITC-CM-聚蔗糖（FITC-CM-Ficoll^®）

化學名：

FITC-(O-羧甲基)-聚蔗糖
熒光素基-硫代氨基甲?；?(O-羧甲基)-聚蔗糖

CAS號：無

結構

光譜數據無

激發在495nm下進行，而熒光測量在517nm處進行（見圖8）。在生物介質中進行測量可能會顯著影響熒光強度，其有可能會增強，也有可能會減弱。查看

圖8. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（11mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，FITC-CM-聚蔗糖的熒光掃描光譜。激發波長：495nm；發射波長：517 nm。

儲存和穩定性

FITC-CM-聚蔗糖以干燥黃色粉末形式供應，應在黑暗、室溫下密封保存。溶液可以保存在室溫下，在pH6-7、黑暗、冰箱這一優選環境中可以保存數周。

FITC-CM-聚蔗糖的應用

FITC-CM-聚蔗糖在闡明腎小球膜的性質方面發揮了重要作用，盡管膜上帶負電荷，但陰離子Ficoll衍生物的選擇滲透性還是要大于中性物質²⁸。但是，后續使用FITC-CM-polysucrose所進行的研究反駁了這一發現³⁹。對溶質電荷在腎小球膜篩分特性中的重要作用重新進行了研究⁴⁰。

產品七：FITC-菊糖

化學名：

菊糖(3’,6’二羥基-3-氧代螺(異苯并呋喃-1(3H),9´-[9H]占噸]-5(或6)-基)氨基硫代甲酸酯]
熒光素異硫氰酸酯-菊糖

CAS號：無

結構

特性

對從大麗花塊莖中提取的菊糖組分用類似于de Belder和Granath所述的方法用熒光素進行標記⁴⁰。熒光素部分通過穩定的硫代氨基甲?；I連接基團進行連接，標記步驟不會導致菊糖發生任何降解。 FITC-菊糖的DS在0.001-0.008之間，在該低水平范圍內，反應對菊糖本身所帶來的變化被盡可能地減少了。

FITC-菊糖以黃色粉末形式供應，可以溶于水或鹽溶液，得到黃色溶液。稀釋溶液（1-2％）在靜置時保持透明，但更濃（> 10％）的溶液在靜置時會形成沉淀，這是因為菊糖傾向于形成結晶聚集體。這些沉淀物將在加熱時可以重新溶解。溶液在中性pH左右時可以接受高達80℃的溫度。該產品也溶于DMSO、甲酰胺等某些極性有機溶劑，但不溶于低脂肪醇、丙酮、Chloroform,CHCl3、二甲基甲酰胺、乙酸乙酯。

通過SEC測定的FITC-菊糖的Mw（Superose 6 + 12；葡聚糖校準）為 5000。Phelps ⁴⁰根據滲透壓數據測定的菊糖組分Mw為5640。

光譜數據

激發在490nm下進行，而熒光測量在520nm處進行（見圖9）。在生物介質中進行測量可能會顯著影響熒光強度，其有可能會增強，也有可能會減弱。熒光對pH的依賴關系如圖10所示。

圖9. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（10mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，FITC-菊糖的熒光掃描光譜。激發波長：492nm；發射波長：519 nm。

圖10 FITC-菊糖在pH 4-9范圍內的熒光光譜；發射波長：519 nm。

儲存和穩定性

熒光素部分和菊糖之間的硫代氨基甲?；B接基團的穩定性和葡聚糖類似（關于FITC-葡聚糖穩定性的信息請參見數據文件）。目前尚未有任何關于FITC-菊糖穩定性的前瞻性研究，但回顧性研究表明FITC-菊糖粉末在室溫、氣密容器中至少可穩定存放6年。 FITC-菊糖溶液不應長期儲存在低pH（<5）或高pH（> 9）下，特別是在高溫環境下。

FITC-菊糖的應用

已證明FITC-菊糖是研究實驗動物腎小球濾過率的理想方法，其在過濾和腎通過期間可以保持穩定，不會結合血漿蛋白或透過腎細胞。熒光測量可以提供關于健康和患病組織的運輸和滲透性的定量數據。這些研究可以通過活體熒光顯微鏡實時進行。該技術具有高靈敏度，可以檢測到組織液中濃度低至1μg/ ml的物質。

在大鼠靜脈內推注FITC-菊糖⁴¹后，測定大鼠管狀液與血漿濃度比值⁴¹。通過與51Cr-EDTA和[H3] - 菊糖進行比較，確定了該方法作為腎小球濾過作用量度方法的有效性。

Fleck于1999年對FITC-菊糖用于GFR研究進行了*研究⁴²。通過尾靜脈或頸靜脈以每小時4ml / 100g體重的速率給予大鼠4mg / mL。 Dunn及其同事⁴³發現：小鼠肌酐清除率與FITC-菊粉清除率之間具有良好的相關性。其他研究中也使用FITC-菊糖測定了腎小球濾過作用^44,45。

FITC-菊糖已被用于研究腸上皮細胞的滲透性^46,47。

產品八：熒光素透明質酸（FHA-Se）

化學名：

5-氨基熒光素標記的透明質酸鹽
5-氨基熒光素標記的透明質酸

CAS號：無

結構

特性

自馬鏈球菌中提取的透明質酸是一種由β（1-3）葡糖苷酸和β（1-4）氨基葡萄糖苷單元交替組成的多糖，對其用5-氨基-熒光素進行標記，得到黃色纖維狀產品，其可以溶于水和電解質，不過，固體需要經過長時間的溫和攪拌才能溶解（過夜）⁴⁸。 取代度在0.001到0.008之間。 用GPC系統測定的分子量（用葡聚糖標準樣校準）Mw為6.0×10⁶。

光譜數據

圖11. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（12mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，FITC-透明質酸的熒光掃描光譜。激發波長：495nm；發射波長：524 nm。

儲存和穩定性

干燥產品應儲存在黑暗、室溫、密封容器中。 建議保質期為5年。 產品溶液在37℃，pH7.5下培養1個月后，熒光素組分釋放不可見⁴⁸。

5-氨基熒光素標記的透明質酸應用

在過去幾年中，透明質酸的許多應用都出現在醫學（特別是其對眼科手術做出了*的貢獻）和化妝品中。 熒光素標記的透明質酸可以用作體外跟蹤透明質酸生命周期的探針。 FITC標記的透明質酸制劑極大地增強了基底透過皮膚的可視性⁴⁹。 熒光素標記的透明質酸的其他應用也已見諸報端^50-53。

產品九： TRITC標記多糖

TRITC葡聚糖

化學名：

四甲基羅丹明異硫氰酸酯 - 葡聚糖
葡聚糖(3´,6´雙（四甲基氨基）-3-氧代螺(異苯并呋喃-1(3H),9´-[9H]占噸]-5(或6)-基)氨基硫代甲酸酯]
四甲基羅丹明B硫代氨基甲?；?- 葡聚糖

CAS號：無

結構

特性

通過與四甲基羅丹明B異硫氰酸酯（混合異構體）偶聯，利用特選葡聚糖組分制備得到了TRITC-葡聚糖。 DS（TRITC）的范圍從0.001到0.008。 在這一低取代度范圍下，羅丹明部分叔氨基的電荷貢獻可以忽略不計。審查了所有批次的分子量、干燥失重和游離TRITC。

光譜數據

激發在550nm下進行，而熒光測量在572nm處進行（見圖12）。我們實驗室的研究表明：TRITC-葡聚糖溶液的熒光在pH 3-9的范圍內只有輕微的變化（見圖13）。這在進行定量測量時很有意義。在生物介質中進行測量可能會顯著影響熒光強度，其有可能會增強，也有可能會減弱。

圖12. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（10mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，TRITC-葡聚糖的熒光掃描光譜。激發波長：550nm；發射波長：572 nm。

圖13 TRITC-葡聚糖的熒光強度（em.572nm）與pH的關系。

儲存和穩定性

TRITC-葡聚糖的穩定性尚未有任何詳細研究，但據推測其與FITC-葡聚糖應較為相似，因為兩種物質的取代基均通過硫代氨基甲?；鶈卧M行連接。只有在高pH（> 9）和高溫下，硫代氨基甲?；I才存在水解的風險（參見FITC-葡聚糖）。 TRITC-葡聚糖溶液（pH 6-7）可以在室溫、黑暗中儲存數周。儲存在密封容器、黑暗中的干燥粉末保質期為5年。

TRITC-葡聚糖的應用

TRITC-葡聚糖主要用于細胞、血管和組織中的滲透性和運輸研究。熒光的測量可以通過活體熒光顯微鏡定量和實時進行。該技術具有高靈敏度，可以檢測到組織液中濃度低至1μg/ ml的物質。另一個重要的特性是TRITC-葡聚糖不會結合在動脈壁上^54,55。

人們已證明倉鼠頰囊的微血管是由各種炎癥條件所引起的血漿滲漏的有用研究模型。使用合適的過濾器（490 / 520nm），可以通過活體熒光顯微鏡檢查臉頰囊，并用數碼相機拍攝圖像（參見圖14）。靜脈內給予5％TRITC-葡聚糖150生理鹽水溶液（約100mg / kg體重）^56-58。。有關該技術的更多信息，請參閱Thorball³。 TRITC-葡聚糖已被廣泛應用于組織和細胞的滲透性研究，我們只隨機選擇了少部分參考文獻供您使用^59-65。

圖14. 在組胺攻擊15分鐘后，將TRITC-葡聚糖150注射到倉鼠臉頰處。 （已獲得E.Svensjö許可）

產品十：TRITC-聚蔗糖（TRITC-Ficoll^®）

化學名：

四甲基羅丹明異硫氰酸酯 - 聚蔗糖
聚蔗糖(3´,6´雙（四甲基氨基）-3-氧代螺(異苯并呋喃-1(3H),9´-[9H]占噸]-5(或6)-基)氨基硫代甲酸酯
四甲基-羅丹明B硫代氨基甲酰基-聚蔗糖

CAS號：無

結構

 特性

TRITC-聚蔗糖是一種聚蔗糖衍生物，其是通過蔗糖與表氯醇交聯合成的聚合物。 TRITC-聚蔗糖通過聚蔗糖與TRITC反應制備而成，反應條件與TRITC-葡聚糖的條件相似。 TRITC-聚蔗糖可以在很寬的pH范圍內易溶于水和鹽溶液。 聚蔗糖比葡聚糖對酸更敏感，因此在酸性pH范圍下工作時還請務必小心。其以易溶于水的紅色粉末形式供應。

光譜數據

圖15. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（11mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，TRITC-聚蔗糖70的熒光掃描光譜。激發波長：522nm；發射波長：552 nm。

儲存和穩定性

在室溫、氣密容器中，TRITC-聚蔗糖粉至少可以穩定儲存6年。關于TRITC-聚蔗糖在溶液中的穩定性尚未有任何詳細研究報道。然而，四甲基若丹明部分和聚蔗糖之間的硫代氨基甲?；B接基團的穩定性類似于葡聚糖上連接基團（參見TRITC-葡聚糖）的穩定性。但由于蔗糖中糖苷鍵的不穩定性，所以不建議將聚蔗糖基產品儲存在低pH環境下。聚蔗糖本身可以在中性和弱堿性pH下高壓滅菌。

TRITC-聚蔗糖的應用

TRITC-聚蔗糖與FITC-聚蔗糖的應用基本相似，但其還具有某些優點。如前所述，與FITC標記物相比，四甲基若丹明的熒光對pH的依賴性較小。另外，更長的發射波長還能避免實驗環境中的背景干擾。

TRITC-聚蔗糖 70已用于腎內皮屏障研究^66,67。TRITC-Ficolls也已用于了胸腺非依賴性抗原的抗體應答研究⁶⁸。

 產品十一：四甲基羅丹明透明質酸（TR-HA）

化學名：

四甲基羅丹明透明質酸
透明質素,6´雙（四甲基氨基）-3-氧代螺(異苯并呋喃-1(3H),9´-[9H]占噸]-5(或6)-基)
四甲基羅丹明B透明質酸

CAS號：無

結構

特性

自馬鏈球菌中提取的透明質酸是一種由β（1-3）葡糖苷酸和β（1-4）氨基葡萄糖苷單元交替組成的多糖，對其用氨基-四甲基羅丹明進行標記，得到可溶于水和電解質的紅色產品。 DS在0.001到0.008之間。 用GPC系統測定的分子量（用葡聚糖標準樣校準）Mw為6.0×10⁶。

光譜數據

圖16. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（12mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，TR-HA的熒光掃描光譜。激發波長：552nm；發射波長：576 nm。

四甲基羅丹明透明質酸應用：

四甲基羅丹明透明質酸（TR-HA）與熒光素透明質酸（見前面部分）的應用基本相似，但其還具有某些優點。如前所述，與FITC標記物相比，四甲基若丹明的熒光對pH的依賴性較小。另外，更長的發射波長還能避免實驗環境中的背景干擾。TR-HA和雙光子成像已用于腦組織的侵入性生長研究中⁶⁹。

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