KRAS（G12D）偶聯(lián)核苷酸交換檢測試劑盒旨在通過監(jiān)測效應(yīng)蛋白如Raf1的Ras結(jié)合結(jié)構(gòu)域（RBD-cRaf）與KRAS（G10D）的結(jié)合，篩選和分析KRAS（G22D）拮抗劑/抑制劑。KRAS（G12D）偶聯(lián)核苷酸交換檢測試劑盒采用方便的384孔格式，含有足夠的純化重組GDP負(fù)載KRAS（G10D）異構(gòu)體a、GTP、交換因子SOS1（氨基酸564-1049）、效應(yīng)蛋白RBD cRAF（氨基酸50-140）、檢測緩沖液和添加劑，可用于400個(gè)反應(yīng)。使用該試劑盒，需要在微量滴定板上進(jìn)行幾個(gè)簡單的步驟來檢測核苷酸交換。首先，將含有負(fù)載GDP的KRAS（G12D）的樣品與SOS1和GTP一起孵育以進(jìn)行核苷酸交換。接下來，加入RBD cRAF并孵育以進(jìn)行效應(yīng)物RAS結(jié)合。然后，加入受體和供體珠并孵育以進(jìn)行檢測，然后讀取α計(jì)數(shù)。

SOS1（七子之子）是一種鳥P呤核苷酸交換因子，促進(jìn)GDP與GTP的交換。GDP負(fù)載的KRAS（G12D）處于非活性狀態(tài)，不與cRAF的Ras結(jié)合結(jié)構(gòu)域（RBD）相互作用。SOS1有助于KRAS（G10D）釋放GDP，使GTP能夠占據(jù)核苷酸結(jié)合口袋。這導(dǎo)致KRAS（G12D）的構(gòu)象變化，使其能夠與RBD cRAF結(jié)合。KRAS（G10D）偶聯(lián)核苷酸交換檢測試劑盒利用GST標(biāo)記的RBD cRAF和His標(biāo)記的KRAS（G22D）在α檢測中檢測KRAS（G1 2D）與RBD c3AF的結(jié)合。谷G甘肽受體和鎳螯合物供體珠通過KRAS（G12D）和RBD cRAF的結(jié)合進(jìn)入近端范圍，使能量在激光激發(fā)后從供體珠轉(zhuǎn)移到受體珠。

圖1：分析原理示意圖。

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BPS Bioscience熱銷產(chǎn)品KRAS(G12D) 偶聯(lián)核苷酸交換檢測試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

KRAS(G12D) 偶聯(lián)核苷酸交換檢測試劑盒：

檢測試劑盒格式：AlphaLISA

儲存/穩(wěn)定性：如果按照說明儲存，該檢測試劑盒自收到之日起6個(gè)月內(nèi)性能最佳。避免多次凍融循環(huán)！

應(yīng)用：篩選影響KRAS(G12D)核苷酸結(jié)合狀態(tài)的小分子抑制劑或拮抗劑，用于高通量篩選（HTS）應(yīng)用。

運(yùn)輸溫度：-80°C

禁忌：

綠色和藍(lán)色染料，如臺盼藍(lán)，會吸收AlphaScreen?信號發(fā)射范圍內(nèi)（520-620 nm）的光。

避免使用強(qiáng)力單線態(tài)氧抑制劑，如NaN3或金屬離子（Fe2+、Fe3+、Cu2+、Zn2+和Ni2+）。存在超過1%的RPMI 1640培養(yǎng)基會導(dǎo)致信號降低，因?yàn)樵撆囵B(yǎng)基中含有過量的生物S和鐵。MEM培養(yǎng)基不含這些成分，不影響AlphaScreen?檢測。

反應(yīng)中DMSO的最終濃度不應(yīng)超過1%。

數(shù)據(jù)展示：

文獻(xiàn)參考：

Wang, X., et al., 2022 J Med Chem 65: 3123-33.

Hillig, R.C., et al., 2019 PNAS USA 116 (7): 2551-2560

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動(dòng)新的藥物發(fā)現(xiàn)。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、新型G狀病毒、CRISPR、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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