Hypoxyprobe?-1太平洋藍試劑盒組件的詳細描述

Hypoxyprobe?-1是一種取代的2-硝基咪唑，其化學名稱為匹莫尼達唑鹽酸鹽，分子量為290.8；水溶性為400毫摩爾（116毫克/毫升）；在324納米處的紫外吸收（在0.9%生理鹽水中的消光系數為7020）。其游離堿基，匹莫尼達唑，分子量為254.3，pKa值為8.7，辛醇水分配系數為8.5。有關Hypoxyprobe?-1的作用機制、常見問題解答（FAQ）和應用，固體Hypoxyprobe?-1在室溫下避光存放兩年，并且在4攝氏度的0.9%生理鹽水（100克/升）中存放4.5年，未檢測到降解（UV和HPLC分析）。 匹莫尼達唑在缺氧細胞中被還原激活，并與蛋白質、肽和氨基酸中的硫醇（巰基）基團形成穩定的加合物。太平洋藍染料-MAb1與這些加合物結合，允許通過免疫化學方法檢測它們。

太平洋藍染料-MAb1是一種染料偶聯的大鼠IgG1單克隆抗體（MAb克隆4.3.11.3），在含有1%牛血清白蛋白和0.09%疊氮鈉的PBS中，以0.5毫克/毫升的濃度供應作為穩定劑。感興趣的組織可以通過冷凍固定切片或甲醛固定的石蠟包埋切片的免疫組織化學研究，或者在組織解離后的流式細胞術進行研究。 注意：太平洋藍染料-MAb1與匹莫尼達唑的蛋白質、肽和氨基酸加合物結合，但在免疫組織化學處理過程中，肽和氨基酸加合物被沖洗掉，因此免疫組織化學缺氧檢測依賴于缺氧組織中匹莫尼達唑的蛋白質加合物。

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【缺氧探針】太平洋藍試劑盒：

應用：用于檢測細胞和組織缺氧的免疫化學方法，包括免疫熒光、免疫過氧化物酶或流式細胞術。這種Hypoxyprobe?-1太平洋藍試劑盒在甲醛固定的石蠟包埋的大鼠腫瘤組織中提供了強烈的免疫染色和非常低的背景。

數量：a. Hypoxyprobe?-1太平洋藍試劑盒包含100毫克、200毫克或1000毫克的Hypoxyprobe?-1（匹莫尼達唑鹽酸鹽）。通常，動物研究中使用的劑量為每公斤體重60毫克。

b. 一個瓶（100毫克和200毫克試劑盒）或兩個瓶（1000毫克試劑盒），含有200微升的稀釋的太平洋藍染料偶聯的IgG1大鼠單克隆抗匹莫尼達唑抗體（克隆11.23.22.R）。每個瓶含有200微升的0.50毫克/毫升的太平洋藍染料-MAb1溶液，該溶液在含有1%牛血清白蛋白和0.09%疊氮鈉的PBS中。太平洋藍染料-MAb1的最佳稀釋度應由研究者確定，但發現1:50-100稀釋度在大鼠腫瘤組織中能給出強烈的免疫熒光染色。特別為免疫熒光設計，太平洋藍染料-MAb1可以在熒光顯微鏡下或在流式細胞術和Western印跡應用中被可視化。通常免疫熒光的抗體稀釋度比免疫過氧化物酶檢測系統中使用的要低。

不提供：用于免疫組織化學分析的標準試劑。

儲存：a. 將Hypoxyprobe?-1固體存放在室溫下避光處。（也可以存放在2-8攝氏度的暗處）。

b. 將太平洋藍染料-MAb存放在2-8攝氏度的暗處。不要冷凍。

檢測說明

對正常或腫瘤組織缺氧的研究始于靜脈輸注、腹腔注射或口服Hypoxyprobe?-1（匹莫尼達唑鹽酸鹽）溶液，劑量為每公斤體重60毫克。對于一只25克的大鼠，這相當于每只大鼠1.5毫克。在小鼠中使用高達400毫克/公斤的劑量，未觀察到毒性或組織缺氧的變化，但60毫克/公斤可以在低成本下獲得良好的免疫染色。 Hypoxyprobe?-1在生理鹽水中的溶解度為116毫克/毫升，因此可以使用非常小的體積來施用Hypoxyprobe?-1。注射或攝取后，Hypoxyprobe?-1分布到所有組織，包括大腦，但它只與那些氧濃度低于14微摩爾的細胞中的含硫蛋白質形成加合物——相當于在37攝氏度下的部分壓力pO2 = 10毫米汞柱。除了腫瘤，正常的組織如肝臟、腎臟和皮膚也包含在pO2 = 10毫米汞柱或以下的細胞。這些正常組織結合Hypoxyprobe?-1。小鼠中Hypoxyprobe?-1的血漿半衰期大約為25分鐘。相比之下，大鼠的血漿半衰期為45分鐘，狗為90分鐘，人類為300分鐘。感興趣的大鼠組織可以在施用Hypoxyprobe?-1后60分鐘或更長時間收獲。在收獲時組織中的Hypoxyprobe?-1將在組織缺氧時被結合，但與組織在60分鐘或更長時間實驗中暴露的量相比，殘留的Hypoxyprobe?-1的量非常小，因此由于殘留的Hypoxyprobe?-1引起的任何非特異性結合是不可檢測的。 除了動物研究，Hypoxyprobe?試劑盒也可用于組織培養中的細胞。通常，細胞懸浮液在缺氧條件下與100到200微摩爾的Hypoxyprobe?-1一起孵化1到2小時。細胞通過細胞旋轉收獲，固定并用太平洋藍MAb-1免疫染色。

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