瘦素，ob基因的產物（1,2），是一種分子量為16 kD的單鏈蛋白激素。它被認為在體重調節中發揮關鍵作用。它的氨基酸序列與其他蛋白質沒有顯著的同源性（1）。瘦素幾乎只由分化的脂肪細胞產生。它作用于中樞神經系統，特別是下丘腦，抑制食物攝入并刺激能量消耗。瘦素受體——不同長度的替代剪接形式——屬于細胞因子類I受體家族。它們在全身廣泛分布，表明瘦素具有目前尚未w全理解的一般作用。存在一種循環形式的瘦素受體，它作為多種瘦素結合蛋白之一。除了其代謝效應外，瘦素還被證明影響多個內分泌軸。在雄性小鼠中，它減弱了饑餓引起的LH、睪酮、甲狀腺素的顯著下降，以及ACTH和p質醇的增加。在雌性小鼠中，瘦素防止了饑餓引起的排卵延遲。由于ob基因突變而缺乏瘦素的Ob/ob小鼠不育。這種缺陷可以通過瘦素的給藥來糾正，但通過禁食減肥則不能，這表明瘦素對生殖功能至關重要。所有這些作用至少部分可以通過瘦素對下丘腦弓狀核神經元中神經肽Y（NPY）表達和分泌的抑制作用來解釋。NPY是食欲的強烈刺激因子，已知它參與調節各種垂體激素，例如通過刺激生長y素抑制GH，抑制促x腺激素或刺激垂體-腎上腺軸。決定循環瘦素水平的最重要變量是體脂肪質量。在規律飲食周期的條件下，瘦素反映了脂肪組織的比例，顯示出指數關系。這種構成性的瘦素合成被許多非激素和激素變量調節。在嚙齒動物和人類中，過度進食、高脂飲食、胰島素和糖皮質激素是刺激因子。已經顯示了禁食、cAMP和β-3-腎上腺素受體激動劑的抑制作用。從這些發現中可以清楚地看出，瘦素是各種代謝和內分泌反饋循環的一個組成部分）。

瘦素（小鼠/大鼠）ELISA是一種酶免疫測定試劑盒，適用于定量測定小鼠和大鼠血清或血漿中的瘦素，用于科學目的。僅供研究使用。不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產品小鼠/大鼠瘦素EIA(96孔)。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

小鼠/大鼠瘦素EIA(96孔)檢測原理：

瘦素（小鼠/大鼠）ELISA是一種所謂的夾心法。它利用兩種不同的特異性高親和力多克隆抗體來治療這種蛋白質。樣本中的瘦素與固定化抗體定量結合。在接下來的步驟中，生物s化抗體又與瘦素結合。洗滌后，加入鏈霉抗生物s蛋白-過氧化物酶偶聯物，其對生物s具有高度特異性，并與抗體的生物s結合。隨后，過氧化物酶催化酶反應，導致藍色。藍色的強度取決于樣品的瘦素含量。通過加入終止溶液來終止反應，并通過測量吸收來量化顏色強度。

技術說明

1 儲存條件

收到試劑盒后，在其有效期內，將其存放在2-8°C。重組后的凍干試劑應存放在-20°C。避免反復凍融。

2 儲存壽命

組分開封后的使用期限保證為4周。未使用的試紙條和微孔板應與干燥劑一起密封存放在2-8°C的夾鎖袋中，并使用提供的框架。重組后的組分應存放在-20°C（或更冷）。再次使用時，應快速但輕柔地解凍（避免溫度升高超過室溫并避免過度渦旋）。只能冷凍一次！1:20稀釋的工作洗滌緩沖液WP在2-8°C下穩定4周。

3 試劑準備

使用前將所有試劑置于室溫（20 - 25°C）。緩沖液中的沉淀在使用前必須通過混合和/或加熱溶解。不能混合不同批次的試劑。

4 重組

標準品A – G和對照KS用稀釋緩沖液VP重組。建議將重組后的試劑在室溫下放置15分鐘，然后使用渦旋混合器c底但輕柔地（不應產生泡沫）混合。只能冷凍一次！

5 稀釋

重組后，將對照KS與稀釋緩沖液VP按相同比例（1:5）稀釋，與樣本相同。所需體積的工作洗滌緩沖液WP是通過將20倍濃縮液與蒸餾水按1:20稀釋來準備的。稀釋1:20的洗滌緩沖液WP穩定4周。

6 測定程序

進行測定時，空白、標準品A-G、對照KS和樣本應盡可能快地（例如，<15分鐘）移液。為避免由于孵育時間差異導致的失真，抗體結合物AK、酶結合物EK以及隨后的底物溶液S應與樣本以相同的順序和相同的時間間隔添加到板中。停止溶液SL應與底物溶液以相同的順序添加到板中。所有測定（空白、標準品A-G、對照KS和樣本）應進行雙重測定。為獲得最佳結果，建議準確移液并遵守操作規程。

7 孵育

室溫孵育意味著在20 – 25°C下孵育。底物溶液S，穩定的四甲基聯苯胺，對光敏感；存放和孵育時應避光。

8 搖動

孵育步驟應在特別適合的微孔板振蕩器的平均旋轉頻率下進行。建議將振蕩器設置為350轉/分鐘。由于振蕩器之間的技術差異，可能需要調整旋轉頻率。搖動不足可能導致溶液混合不充分和光學密度低、變異性高和/或假值；搖動過度可能導致光學密度高和/或假值。

9 洗滌

正確的洗滌對于測定的可靠和精確性能至關重要。不c底的洗滌會對測定結果產生不利影響。可能的后果是測量的光學密度出現不可控的、非特異性的變化，可能導致假結果。高背景值或高變異性等效應可能表明洗滌問題。所有洗滌必須使用提供的稀釋至工作濃度的洗滌緩沖液進行。每個洗滌周期和每個孔的洗滌體積至少為300 ?L。如果手動洗滌，可通過多步裝置、多通道移液器或噴瓶分配洗滌緩沖液。將板洗滌至生物危害垃圾桶，然后每個孔加入300?L洗滌緩沖液WP，倒出內容物，并在吸收性組織上拍打。重復此步驟2次，共進行3次洗滌。

典型標準曲線示例

以下數據僅用于演示，不能代替分析時生成的數據。

圖1：具有多項式二次曲線擬合的示例性標準曲線。

文獻參考：

1. Zhang Y, Proenca R, Maffei M, Barone M, Leopold L, Friedman JM. 1994 Positional cloning of themouse obese gene and its human homologue. Nature. 372:425-432.

2. Halaas JL, Gajiwala KS, Maffei M, et al. 1995 Weight-reducing effects of the plasma protein encodedby the obese gene. Science. 269:543-546.

3. MacDougald OA, Hwang CS, Fan H, Lane MD. 1995 Regulated expression of the obese geneproduct (leptin) in white adipose tissue and 3T3-L1 adipocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 92:9034-9037.

4. Rentsch J, Chiesi M. 1996 Regulation of ob gene mRNA levels in cultured adipocytes. FEBS Lett.379:55-59.

5. Wabitsch M, Jensen PB, Blum WF, et al. 1996 Insulin and cortisol promote leptin production incultured human fat cells. Diabetes. 45:1435-1438.

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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