A-375細胞，人惡性黑色素瘤細胞

產品名稱：A-375

細胞形態：上皮樣

組織來源：

傳代情況：P4-5代T25細胞培養瓶

細胞數量：1~3*10⁶細胞/25cm2培養瓶

培養條件：RPMI1640+10%FBS

生長條件： 95%空氣+5%二氧化碳 37攝氏度

生長狀態：貼壁生長

存儲條件：90%FBS+10%dmso

A-375細胞，人惡性黑色素瘤細胞

對于貼壁細胞，若細胞漂浮：培養瓶不開封，用75%酒精擦拭后平躺置于培養箱內。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，換成新鮮的培養基；如細胞還不貼壁，將細胞離心收集移到新的培養瓶中，原培養瓶加部分新鮮培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。對于懸浮細胞：收到細胞后，將細胞全部離心，去掉舊的培養基，換成新鮮的培養基繼續培養。

特別注意：（如使用公共實驗室或者初次接觸，建議添加雙抗培養）

（1）貼壁細胞收到當天有少量或沒有飄忽的細胞可以當天換液，因為路途顛簸造成大量飄忽的情況時，請將細胞換液后放置培養箱孵育到第二天再做消化傳代，請優先選擇直徑6cm的培養皿進行傳代培養

（2）收到細胞后請盡快更換為含10%血清的新鮮培養基，如因特殊情況需要繼續使用原瓶，請在原瓶培養基中額外添加10%的血清，（原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時）

（3）如簽收時出現培養瓶壁破裂，漏液等情況請及時做好照片記錄并聯系SUER技術人員

細胞接收后的操作流程與注意事項：

1）貼壁細胞生長緩慢；適當提高血清濃度（最高不能超過20%），或可根據該細胞生長特性生長密度，考慮胰酶消化后，轉移到新的培養瓶繼續培養

2）如果細胞為貼壁細胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養基到新的培養皿/瓶繼續培養3天；同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養基培養3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現增值而是繼續脫落死亡，請及時聯系實驗室技術人員會跟進解決

3）生長不均：貼壁細胞若出現分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細胞，加入新鮮培養基進行培養

細胞常規培養傳代流程（請嚴格遵照無菌操作）

（1）吸出原培養瓶中的培養基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2-3ml 0.25%胰酶進行消化細胞（注意把握消化時間，通常控制在1-2min）

（2）注意培養基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存

（3）取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中，添加適當的*培養基，把細胞懸液打勻，于培養箱中培養

（4）鏡下觀察消化情況，在HS505.T人淋巴結成纖維樣細胞生長特性邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂浮）去掉胰酶，加6-8ml*培養基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散。