實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：

1）Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現性定量方法，已得到，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

產品名稱：PCR檢測試劑盒
規格：50T
分類：PCR檢測試劑盒
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。

操作流程

收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產物 ——> 用感受態細胞做轉化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質粒抽提——>質粒測序——>測序結果分析——>克隆信息輸入數據庫——>質粒實物保存。

ⅣD組磷脂酶A2(PLA2G4D)重組蛋白

高溫需求因子A4(HTRA4)重組蛋白

ⅫB組磷脂酶A2(PLA2G12B)重組蛋白

解整合素金屬蛋白酶33(ADAM33)重組蛋白

PCR實驗方法步驟：
方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix（2mM）

4 μl引物1（10pM）

2 μl引物2（10pM）2 μl     Taq

酶 （2U/μl）1 μl     DNA

模板（50ng-1μg/μl）

1 μl加ddH2O至 50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保7min。

定量PCR方法：

a、競爭法　　產品僅用于科研實驗
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。

b、內參照法

在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。

c、PCR－ELISA法

利用di高辛等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現定量檢測目的。操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

下列是公司正在銷售的產品：

二氫二醇脫氫酶2(DDH2)重組蛋白

醛糖還原酶相似蛋白1(ARL1)重組蛋白

蛋白酶23(PRSS23)重組蛋白

核糖核酸酶A10(RNASE10)重組蛋白

肽酶抑制因子16(PI16)重組蛋白

環氧化合物水解酶4(EPHX4)重組蛋白

輔酶Q10同源物B(COQ10B)重組蛋白

羧酸酯酶5A(CES5A)重組蛋白

脫羧酶樣蛋白1(GADL1)重組蛋白

透明質酸氨基葡糖苷酶1(HYAL1)重組蛋白

絲蛋白酶33(PRSS33)重組蛋白

二氫二醇脫氫酶2(DDH2)重組蛋白 物種：Homo sapiens (Human，人)

醛糖還原酶相似蛋白1(ARL1)重組蛋白 物種：Homo sapiens (Human，人)

蛋白酶23(PRSS23)重組蛋白 物種：Homo sapiens (Human，人)

核糖核酸酶A10(RNASE10)重組蛋白 物種：Homo sapiens (Human，人)

肽酶抑制因子16(PI16)重組蛋白 物種：Homo sapiens (Human，人)

環氧化合物水解酶4(EPHX4)重組蛋白 物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)

輔酶Q10同源物B(COQ10B)重組蛋白 物種：Homo sapiens (Human，人)

羧酸酯酶5A(CES5A)重組蛋白 物種：Homo sapiens (Human，人)

脫羧酶樣蛋白1(GADL1)重組蛋白 物種：Homo sapiens (Human，人)

透明質酸氨基葡糖苷酶1(HYAL1)重組蛋白 物種：Homo sapiens (Human，人)

蛋白酶33(PRSS33)重組蛋白 物種：Homo sapiens (Human，人)

RIO激酶1(RIOK1)重組蛋白 物種：Homo sapiens (Human，人)

NADH脫氫酶5(ND5)重組蛋白 物種：Homo sapiens (Human，人)

核糖核酸酶A12(RNASE12)重組蛋白 物種：Homo sapiens (Human，人)

血管緊張素轉化酶(ACE)重組蛋白 物種：Bos taurus; Bovine (Cattle，牛)

血管緊張素轉化酶(ACE)重組蛋白 物種：Homo sapiens (Human，人)

血管緊張素轉化酶(ACE)重組蛋白 物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)

血管緊張素轉化酶(ACE)重組蛋白 物種：Sus scrofa; Porcine (Pig，豬)

血管緊張素轉化酶(ACE)重組蛋白 物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)

血管緊張素轉化酶(ACE)重組蛋白 物種：Oryctolagus cuniculus (Rabbit，兔)

腦膜瘤表達抗原5(MGEA5)重組蛋白 物種：Homo sapiens (Human，人)

腦膜瘤表達抗原5(MGEA5)重組蛋白 物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)

腦膜瘤表達抗原5(MGEA5)重組蛋白 物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)

基質金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白 物種：Bos taurus; Bovine (Cattle，牛)

基質金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白 物種：Canis familiaris; Canine (Dog，犬)

基質金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白 物種：Capra hircus; Caprine (Goat，山羊)

PCR檢測試劑盒基質金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白 物種：Equus caballus; Equine (Horse，馬)

基質金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白 物種：Chicken (Gallus，雞)

基質金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白 物種：Homo sapiens (Human，人)