操作流程
收集基因信息——>設(shè)計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存。

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
下列相關(guān)產(chǎn)品：
番鴨細(xì)小病毒PCR檢測試劑盒

反芻獸埃立克體PCR檢測試劑盒

反芻獸考德里氏體PCR檢測試劑盒

反芻獸曼氏桿菌PCR檢測試劑盒
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性定量方法，已得到，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛等標(biāo)記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
2-Amino-N-(2-chloro-6-methylphenyl) thiazole-5-carboxamide  中文名：  分子式：C11H10ClN3OS  度：98.0%  小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Dabigatran etexilate  中文名：  分子式：C34H41N7O5  度：98.0%  小鼠脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Ethyl 3-(3-amino-4-(methylamino)-N-(pyridin-2-yl)benzamido)propanoate  中文名：  分子式：C18H22N4O3  度：98.0%  小鼠交聯(lián)物(PY)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

N-(4-Cyanophenyl)glycine  中文名：  分子式：C9H8N2O2  度：98.0%  小鼠骨橋素(OPN)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Methyl 1-[(2'-cyanobiphenyl-4-yl)methyl]-2-ethoxy-1H-benzimidazole-7-carboxylate  中文名：  分子式：C25H21N3O3  度：98.0%  小鼠Ⅰ型膠原C端肽elisa試劑盒   小鼠Ⅰ型膠原C端肽試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠Ⅰ型膠原C端肽試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠Ⅰ型膠原C端肽試劑盒、小鼠Ⅰ型膠原C端肽eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

103-79-7  Phenylacetone (exempt preparation)  1mg  Herba andrographisPCR鑒定試劑盒 

103-82-2  Phenylacetic Acid  10mg  Herba andrographisPCR鑒定試劑盒 

103-82-2  Phenylacetic Acid  50mg  Squama manis穿山甲PCR鑒定試劑盒 

1038395-65-1  KX2-391 dihydrochloride  10mg  Radix cyathulae川牛膝PCR鑒定試劑盒 

1038395-65-1  KX2-391 dihydrochloride  10mM(in1mLDMSO)  Radix cyathulae川牛膝PCR鑒定試劑盒
禽腎炎病毒型PCR檢測試劑盒10141-51-2  CP 24,879 (hydrochloride)  1mg  Folium mori桑葉染料法PCR鑒定試劑盒 

10141-51-2  CP 24,879 (hydrochloride)  5mg  Folium mori桑葉染料法PCR鑒定試劑盒 

10141-51-2  CP 24,879 (hydrochloride)  10mg  Fructus mori桑椹染料法PCR鑒定試劑盒 

10141-51-2  CP 24,879 (hydrochloride)  50mg  Fructus mori桑椹染料法PCR鑒定試劑盒 

10144-66-8  H-Ala-p-nitrobenzyl ester . HBr  5g  Herba taxilli桑寄生染料法PCR鑒定試劑盒
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。產(chǎn)品僅用于科研實驗
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。