詳細(xì)介紹
下列相關(guān)產(chǎn)品:
布魯塞爾德克酵母PCR檢測試劑盒
布魯氏桿菌屬通用PCR檢測試劑盒
布魯氏菌PCR試劑盒
布魯氏菌核酸熒光PCR檢測試劑盒(探針法)
操作流程
收集基因信息——>設(shè)計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
蜂房小甲蟲PCR檢測試劑盒 | Aethina tumidaPCR | 50T |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性定量方法,已得到,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標(biāo)記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時,內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛等標(biāo)記引物,擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。產(chǎn)品僅用于科研實驗
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
下列是公司正在銷售的產(chǎn)品:
143TK細(xì)胞,胸腺激酶缺陷性細(xì)胞系 鼠傷Ta100 大鼠腎小球系膜細(xì)胞;HBZY-13,5-二-L-酪3,5-Diiodo-L-tyrosine質(zhì)量規(guī)格:BR,98%
CX3CL1 Protein Canine 重組狗 Fractalkine / CX3CL1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)L-脯甲酯鹽酸鹽L-Proline methyl ester 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR
MG-63(骨肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 CD320 / 8D6A 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) L-絲甲酯鹽酸鹽L-Serine methyl ester 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
犬胸腺細(xì)胞;cf2ThL-色甲酯鹽酸鹽L-Tryptophan methyl ester 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
前列腺平滑肌細(xì)胞(HPSMC)(5×105)L-酪甲酯L-Tyrosine methyl ester 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
滑膜細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)維生素C鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定 ascorbate
骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs) 肝癌細(xì)胞,Hep G2細(xì)胞 C127(細(xì)胞)標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Thiamine nitrate
癌細(xì)胞;MDA-MB-157α-,細(xì)辛(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品alpha-Asarone
BMPR1A Others Mouse 小鼠 ALK-3 / BMPR1A 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:鑒別Dioxopromethazine
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-E1特比萘芬-d7鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格:美國進口Terbinafine-d7
蜂房小甲蟲PCR檢測試劑盒1175954-87-6 Arachidonoyl m-Nitroaniline 50mg Mycobacterium avian禽結(jié)核分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
1175954-87-6 Arachidonoyl m-Nitroaniline 5mg Mycobacterium avium鳥分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
117609-50-4 Tauroursodeoxycholate dihydrate 10mM*1mLinDMSO Mycobacterium asiaticum亞洲分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
117609-50-4 Tauroursodeoxycholate dihydrate 50mg Mycobacterium avian禽結(jié)核分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
117620-76-5 H-Pro-Thr-His-Ile-Lys-Trp-Gly-Asp-OH 100mg Mycobacterium abscessus complex膿腫分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒