實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現性定量方法，已得到，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

操作流程
收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產物 ——> 用感受態細胞做轉化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質粒抽提——>質粒測序——>測序結果分析——>克隆信息輸入數據庫——>質粒實物保存。

下列相關產品：
鮑皰疹樣病毒PCR檢測試劑盒

鮑球狀病毒PCR檢測試劑盒

鮑氏不動桿菌PCR檢測試劑盒

貝巴魯病毒PCR檢測試劑盒

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

定量PCR方法：
a、競爭法　　產品僅用于科研實驗
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現定量檢測目的。

操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

下列是公司正在銷售的產品：
1-(4-(3-Chloropropoxy)-3-methoxyphenyl)ethanone  58113-30-7  中文名：  分子式：C12H15ClO3  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠睪elisa試劑盒   小鼠睪試劑盒   規格型號：96T/48T   小鼠睪試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠睪試劑盒、小鼠睪eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

1-(2-Chloroacetyl)pyrrolidine-2-carbonitrile  207557-30-5  中文名：  分子式：C7H9ClN2O  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠高遷移率族蛋白elisa試劑盒   小鼠高遷移率族蛋白試劑盒   規格型號：96T/48T   小鼠高遷移率族蛋白試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠高遷移率族蛋白試劑盒、小鼠高遷移率族蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

1-(2-Amino-5-chlorophenyl)-1-(trifluoromethyl)-3-cyclopropyl-2-propyn-1-ol  209414-27-7  中文名：  分子式：C13H11ClF3NO  度：98.0%      小鼠高敏狀腺原酸elisa試劑盒   小鼠高敏狀腺原酸試劑盒   規格型號：96T/48T   小鼠高敏狀腺原酸試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠高敏狀腺原酸試劑盒、小鼠高敏狀腺原酸eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  

(Z)-Lachnophyllum lactone  81122-95-4  中文名：  分子式：C10H10O2  度：%  關鍵詞：  植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

(Z)-Butylidenephthalide  72917-31-8  中文名：  分子式：C12H12O2  度：%  關鍵詞：    小鼠睪(T)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

102586-30-1  NSC 12  25mg  Rhizoma bletillae白及染料法PCR鑒定試劑盒 

102586-30-1  NSC 12  5mg  Radix ampelopsis白蘞染料法PCR鑒定試劑盒 

1025967-78-5  Lifitegrast  100mg  Semen ginkgo白果染料法PCR鑒定試劑盒 

1025967-78-5  Lifitegrast  10mg  Bulbus lilii百合染料法PCR鑒定試劑盒 

1025967-78-5  Lifitegrast  200mg  Semen ginkgo白果染料法PCR鑒定試劑盒
衣氏放線菌PCR檢測試劑盒1001917-37-8  MK-8033  5mg  Flos buddlejae密蒙花探針法PCR鑒定試劑盒 

10020-43-6  Ethyleneglycolmonooctylether  5g  Flos mume梅花探針法PCR鑒定試劑盒 

10020-43-6  Ethyleneglycolmonooctylether  25g  Flos mume梅花探針法PCR鑒定試劑盒 

100-21-0  Terephthalic acid  5g  Flos rosae rugosae玫瑰花探針法PCR鑒定試劑盒 

1002100-44-8  Oleoyl Serotonin  5mg  Flos rosae rugosae玫瑰花探針法PCR鑒定試劑盒