詳細介紹
ELISA Kit檢測試劑盒優點多,更加方便我們的科研學者進行科學實驗,是科研實驗的好伙伴。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
VEGF-C ELISA Kit | GOY-E100138 |
實驗流程:
1. 實驗前標準品、試劑及樣本的準備;
2. 加樣(標準品及樣本)100µL,37°C孵育1小時;
3. 吸棄,加檢測溶液A100µL,37°C孵育1小時;
4. 洗板3次;
5. 加檢測溶液B100µL,37°C孵育30分鐘;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分鐘;
8. 加終止液50µL,立即450nm讀數。
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
注意事項:
1.加樣:
①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經常校正其準確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”,因此盡量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復合物脫離;
②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,或適當增加洗板的次數;
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結果要在15-30 min內完成,定性測定用肉眼判讀試驗結果時,反應板應水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標儀讀取結果,酶標儀不應置于陽光或強光照射下,需先預熱15-30 min再進行測試。
番瀉苷元A;Sennidin A 規格: 20mg 訂購|咨詢 Hep G2(人肝細胞)5×106cells/瓶×2
因 訂購|咨詢 規格: 50mg 中胚層誘導早期反應蛋白2抗體 NUP50 ELISA Kit 50kDa核孔蛋白(NUP50)ELISA試劑盒
酰天素;Acegastrodine 訂購|咨詢 規格: 20mg 酰膽堿受體前體蛋白AChRα1抗體 CD34 ELISA Kit CD34分子(CD34)ELISA試劑盒
漆黃素;非瑟;紫鉚素;非瑟素;3,3' 訂購|咨詢 規格: HPLC≥98%,20mg/支 芳香酰胺脫酰基酶抗體 CYP21B ELISA Kit 細胞色素P450c21B/21-羥化酶(CYP21B)ELISA試劑盒
木蘭脂素;magnolin 規格: 20mg 訂購|咨詢 HUVEC(HUV-EC-C) (人臍靜脈血管內細胞)5×106cells/瓶×2
巴戟天對照品 訂購|咨詢 規格: 1g 自噬微管相關蛋白輕鏈β3抗體 HSPA1L ELISA Kit 70kDa熱休克蛋白1樣蛋白(HSPA1L)ELISA試劑盒
光甘草定;Glabridin 規格: 20mg 訂購|咨詢 Hela 299(人宮頸細胞)5×106cells/瓶×2
DL-beta-丙氨(>98%,BR) 質量規格:>98%,BR DL-beta-Phenylalanine AML-193(人急性單核細胞白血病單核細胞)5×106cells/瓶×2
抗A,抗B血型定型試劑(單克隆抗體) 規格: 訂購|咨詢 A7r5(大鼠胸大動脈平滑肌細胞)5×106cells/瓶×2
人參皂苷Rb1 訂購|咨詢 規格: 20mg 丙型肝炎病毒-NS1抗體 SCGN ELISA Kit 促泌素(SCGN)ELISA試劑盒
4-(三氟基)煙酰胺 質量規格:美國進口 4-(Trifluoromethyl)nicotinamide 大鼠神經膠質瘤細胞英文名稱:C6
人參二 訂購|咨詢 規格: HPLC≥98%;20mg 熱休克蛋白27相關蛋白1抗體 DEFβ116 ELISA Kit 防御素β116(DEFβ116)ELISA試劑盒
黃芪多糖 訂購|咨詢 規格: HPLC≥70%;20mg CD3抗體 HDAC5 ELISA Kit 組蛋白脫酰基酶5(HDAC5)ELISA試劑盒
VEGF-C血管內皮細胞生長因子CELISA KitLauryl Sulfate Broth
Agar EMB Eosin methylene-blue lactose sucrose agar 1.01347.0503MERCK默克
BPLS Agar Brilliant-green phenol-red-lactose sucrose agar 1.07232.0500MERCK默克
胰酪胨大豆酵母浸膏肉湯(TSB-YE) 250(g)
克氏枸櫞酸鹽培養基 250(g)
甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂基礎(MYP) 250(g)
發酵蛋白胨 250
支原體肉湯基礎 (CM0403) Oxoid
RPMI 1640,(1X),液體(IVD) 含L-谷氨酰胺11875-093
液體D(0.1%蛋白胨水和吐溫80) 無菌實驗中用作沖洗/稀釋液300mL*10
SABOURUD 2% dextrose broth 沙氏 2%右旋糖肉湯 1.08339.0500MERCK默克
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。,酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導大量的催化反應,產生可供觀察的顯色反應現象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 24μg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
12μg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
6μg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
3μg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5μg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。