詳細介紹
ELISA Kit檢測試劑盒優(yōu)點多,更加方便我們的科研學者進行科學實驗,是科研實驗的好伙伴。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
cAMP ELISA Kit | GOY-E100244 |
實驗流程:
1. 實驗前標準品、試劑及樣本的準備;
2. 加樣(標準品及樣本)100µL,37°C孵育1小時;
3. 吸棄,加檢測溶液A100µL,37°C孵育1小時;
4. 洗板3次;
5. 加檢測溶液B100µL,37°C孵育30分鐘;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分鐘;
8. 加終止液50µL,立即450nm讀數(shù)。
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
注意事項:
1.加樣:
①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經(jīng)常校正其準確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”,因此盡量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復合物脫離;
②洗板機洗板時應經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結(jié)合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,或適當增加洗板的次數(shù);
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時,反應板應水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標儀讀取結(jié)果,酶標儀不應置于陽光或強光照射下,需先預熱15-30 min再進行測試。
桃葉珊瑚苷;杜仲苷 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支 結(jié)核分枝桿菌分泌性蛋白ESAT6抗體 CHSY1 ELISA Kit 糖合酶1(CHSY1)ELISA試劑盒
鋅試劑(≥85%(HPLC)) 質(zhì)量規(guī)格:≥85%(HPLC) Zincon TE-13(人食管細胞)5×106cells/瓶×2
新霉胺 訂購|咨詢 規(guī)格: 80mg 癌增強蛋白2抗體 INSRA ELISA Kit 胰島素受體α(INSRA)ELISA試劑盒
鉍(>98%,BR) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR Bismuth (III) sulfate 葡萄球菌增菌肉湯/Staphylococcus Enrichment Broth凝固酶陽生葡萄球菌選擇性增菌250克國產(chǎn)/進口
四環(huán)素 質(zhì)量規(guī)格:進分 Tetracycline 膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mL
補骨脂定 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg 熱休克蛋白71抗體 DCXR ELISA Kit 二羰基/L-木糖還原酶(DCXR)ELISA試劑盒
蒼術(shù)(90%)鑒別用 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg 人防御素5(DEF5)ELISA試劑盒人96T15.6-1000 pg/mL小鼠誘導型一氧化氮合酶(NOS2)ELISA試劑盒,英文名:NOS2 ELISA Kit
蘆/蕓香葉苷(標準品) 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,標準品 Rutin SIM動力培養(yǎng)基/SIM培養(yǎng)基/Motility Test Medium(Semisolid)李氏菌動力觀察,H抗原位相變異試驗;化、動力、吲哚試驗250克國產(chǎn)/進口
鹽舍曲林 英文名稱:Sertraline hydrochloride 保存:-20℃ 規(guī)格:100mg Rho家族GTP酶2抗體
厄多司坦 質(zhì)量規(guī)格:>98.5% Erdosteine 人大細胞肺細胞英文名稱:NCI-H661
積雪草苷 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白9抗體 IL1RAP ELISA Kit 白介素1受體輔助蛋白(IL1RAP)ELISA試劑盒
(-)-莨菪堿,L-天仙子胺,L-天仙子堿 質(zhì)量規(guī)格:>99% (-)-Hyoscyamine 小鼠腺英文名稱:EMT-6
土鱉對照藥材 訂購|咨詢 規(guī)格: 1g ELISA Kit for Human C-C motif chemokine 4小鼠白細胞介素7(IL-7)ELISA試劑盒,英文名:IL-7 ELISA Kit
cAMP環(huán)磷酸腺苷ELISA Kit甘露糖鹽瓊脂 (Chapman 培養(yǎng)基) (CM0085) Oxoid
L-Trptophan L-色氨酸 Japan100g
溴棕*銨瓊脂 選擇分離和鑒別銅綠假單胞菌500g
Salmosyst selective supplement tablets Salmosyst選擇添加片 1.10141.0500MERCK默克
酪蛋白鈣瓊脂
阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基 200g/瓶
Baird-Parker 瓊脂基礎(chǔ) 250(g)
改良克氏雙糖鐵瓊脂 250(g)
伊紅美藍瓊脂(EMB) 1000(g)
紫紅膽汁葡萄糖瓊脂 (CM0485) Oxoid
Tryptone Soya Broth(Soybean Casein Digest Medium USP)胰蛋白胨大豆肉湯 Oxoid500G
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。,酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導大量的催化反應,產(chǎn)生可供觀察的顯色反應現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 24μg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
12μg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
6μg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
3μg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5μg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。