詳細介紹
ELISA Kit檢測試劑盒優點多,更加方便我們的科研學者進行科學實驗,是科研實驗的好伙伴。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
TIMP-4 ELISA Kit | GOY-E100126 |
實驗流程:
1. 實驗前標準品、試劑及樣本的準備;
2. 加樣(標準品及樣本)100µL,37°C孵育1小時;
3. 吸棄,加檢測溶液A100µL,37°C孵育1小時;
4. 洗板3次;
5. 加檢測溶液B100µL,37°C孵育30分鐘;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分鐘;
8. 加終止液50µL,立即450nm讀數。
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
注意事項:
1.加樣:
①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經常校正其準確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”,因此盡量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復合物脫離;
②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,或適當增加洗板的次數;
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結果要在15-30 min內完成,定性測定用肉眼判讀試驗結果時,反應板應水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標儀讀取結果,酶標儀不應置于陽光或強光照射下,需先預熱15-30 min再進行測試。
冬凌草素-對照品;有報告 規格: 20mg 訂購|咨詢 小鼠淋巴成纖維細胞*培養基100mL
螺胺;純品型;標準品;有證書 訂購|咨詢 規格: 0.1g Epsin2B蛋白抗體 GDF11 ELISA Kit 生長分化因子11(GDF11)ELISA試劑盒
醌式利福平(標準品) 質量規格:HPLC法有關物質檢查 RIFAMPIN QUINONE 珊瑚色諾卡氏菌 Nocardia corallina肉桂色曲霉 Aspergillus cinnamomeus
云南白藥對照品 英文名稱:Yunnan Baiyao control 保存:-20℃ 規格:10mg 原鈣粘附蛋白α4抗體
咯氨三(標準品) 質量規格:HPLC>98%,標準品 Ketorolac Tromethamine 大鼠腎細胞英文名稱:NRK
烏美司 訂購|咨詢 規格: HPLC≥98%;100mg 神經膜抗體 SGLT4 ELISA Kit 鈉/葡萄糖協同轉運蛋白4(SGLT4)ELISA試劑盒
鷹嘴豆芽素A(標準品) 質量規格:HPLC≥98%,標準品 Biochanin A 人腎動脈內皮細胞*培養基大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
通關藤苷I 訂購|咨詢 規格: 20mg 酪蛋白激酶1γ1抗體 ADAMTS9 ELISA Kit 血小板反應蛋白解整合素金屬肽酶9(ADAMTS9)ELISA試劑盒
雞血藤 英文名稱:Caulis Spatholobi 保存:-20℃ 規格:2g 核仁同源蛋白17抗體
常山素 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 ELISA Kit for Human Neurofilament medium polypeptide大鼠可溶性血纖蛋白單體復合物(SFMC)ELISA試劑盒,英文名:SFMC ELISA Kit
N-酰基-5'-O-(4,4'-二氧基三基)-2'-脫氧胞苷 質量規格:>98%,BR DMT-Ac-dC NCI-H295R(人腎上腺皮質腺細胞)SF9, 昆蟲卵巢細胞
烏美司 訂購|咨詢 規格: 100mg 17號染色體開放閱讀框104抗體 LEP ELISA Kit 苗條素(LEP)ELISA試劑盒
蟾毒它靈(標準品) 質量規格:HPLC≥98%,標準品 Bufotaline 球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis毛霉屬 Mucor sp.
TIMP-4基質金屬蛋白酶抑制因子4ELISA Kit庖肉牛肉粒 100(g)
乙基紫疊氮鈉肉湯 250(g)
乳桿菌選擇性培養基(LBs瓊脂) 250(g)
PNB(對硝甲酸) 1加入改良羅氏培養基中制成PNB培養基,用于分枝桿菌菌型鑒定
沙保氏液體培養基 (CM0147) Oxoid
弧菌顯色培養基 用于霍亂弧菌、副溶血弧菌的分離和鑒別1000ml
月桂胰胨肉湯 即LST肉湯,用于大腸菌群檢測500g
R2A agar R2A瓊脂 1.00416.0500MERCK默克
亮綠酚紅乳糖蔗糖瓊脂
堿性瓊脂平板 250(g)
Rustigian氏尿素培養基基礎 250(g)
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。,酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導大量的催化反應,產生可供觀察的顯色反應現象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 24μg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
12μg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
6μg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
3μg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5μg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。