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iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)
iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)
?簡單介紹：
蛋白質(zhì)組分析(proteomics) 是對生物蛋白組(proteome) 的分析與檢測，蛋白組分析先要將混合蛋白質(zhì)分離, 分離的主要方法是蛋白雙向電泳。已被分離的蛋白質(zhì)由質(zhì)譜分析對其進(jìn)行鑒定。
的4種同位素標(biāo)記試劑由４種相對分子質(zhì)量分別為114、115、116和117的報(bào)告基團(tuán)(reporter group)，相對分子質(zhì)量分別為31、30、29 和28 的質(zhì)量平衡基團(tuán)(balance group)以及一個(gè)相同的肽反應(yīng)標(biāo)記試劑基團(tuán)(peptide reactive group)組成。不同的報(bào)告基團(tuán)分別與相應(yīng)的平衡基團(tuán)相配后，相對分子質(zhì)量均為145，即等量異位標(biāo)簽(isobaric tag)。
將蛋白質(zhì)裂解為肽段，然后用iTRAQ試劑進(jìn)行差異標(biāo)記。由于iTRAQ試劑是等量的，即不同同位素在標(biāo)記同一多肽后在*級質(zhì)譜檢測，分子量相同，用串聯(lián)質(zhì)譜方法對在*級質(zhì)譜檢測到前體離子(precursor ion)進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，產(chǎn)物離子通過第二級質(zhì)譜進(jìn)行分析。在二級質(zhì)譜分析過程中，報(bào)告基團(tuán)、質(zhì)量平衡基團(tuán)和多肽反應(yīng)基團(tuán)之間的鍵斷裂，質(zhì)量平衡基團(tuán)丟失，產(chǎn)生低質(zhì)荷比(m/z)的報(bào)告離子。由于二級質(zhì)譜可分析相對分子質(zhì)量相差1的報(bào)告基團(tuán)，不同報(bào)告基團(tuán)離子強(qiáng)度的差異就代表了它所標(biāo)記的多肽的相對豐度。同時(shí)，多肽內(nèi)的酰胺鍵斷裂，形成一系列b 離子和y 離子，得到離子片段的質(zhì)量數(shù)，通過數(shù)據(jù)庫查詢和比較，可以鑒定出相應(yīng)的蛋白質(zhì)前體.
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