牛津杯 效價 藥敏實驗抑菌試驗

牛津杯 效價 藥敏實驗抑菌試驗

1. 首先將事先配好的指示菌培養基煮融，稍冷卻后放到恒溫箱中，60℃恒溫2-3小時。（因為恒溫時間較長，所以*件事情就是先把培養基放到恒溫箱恒溫，在恒溫的這段時間做別的事情可以節約很多時間。）

2. 把培養基放到恒溫箱后開超凈工作臺的紫外線殺菌20分鐘。殺菌的前把經過高壓滅菌的牛津杯、鑷子、Ep管、培養皿、移液槍等需要用到的工具放進工作臺，紫外線可以將表面的菌殺死。

3. 殺菌結束后將微生物發酵液管從搖床培養箱拿到超凈工作臺，用移液槍將試管中的液體吸到Ep管中，然后放到離心管離心。在離心的時候配置甘油培養基，用來保存菌種。

4. 離心結束后將Ep管和甘油培養基拿到工作臺，將Ep管的上清液吸到一個經過殺菌的管中放置備用。吸干凈上清液后往Ep管中加入1ml甘油培養基用來保藏菌種（沉淀物），將菌種放到-20℃的冰箱保存。

5. 牛津杯測微生物代謝產物一般要將上清液稀釋成5個濃度梯度，即1mg/ml  0.1mg/ml  0.01mg/ml  0.001mg/ml  0.0001mg/ml。這時候指示菌培養基應該恒溫到60℃了。

6. 將指示菌培養基拿到工作臺上，加入所需的指示菌，搖勻，然后倒平板。倒平板后要馬上用鑷子將牛津杯豎直插入到培養基上面，靜置。帶培養基凝固后拔出牛津杯。

7. 用移液槍吸取200微升剛剛稀釋好的上清液到牛津杯的孔中，注意不要讓上清液占到周圍也不要讓上清液溢出牛津杯表面。加液前要先將每個孔編號，例如ABCDE，因為加液后不可以將培養皿倒過來。全部上清液弄好之后將培養皿放到恒溫箱中培養12小時，觀察抑菌情況。如果上清液有抑菌活性，牛津杯周圍會形成一個透明圈，用直尺量直徑并記錄。