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詳細介紹
ERseeing ＜Endoplasmic Reticulum Green＞
對活細胞影響少，適用于長時間成像的ER染色試劑
本產品是活細胞成像用的不可逆ER染色試劑。與傳統的熒光標記Glibenclamide系ER染色試劑相比，對細胞功能的藥理作用小，由于其不可逆性，更換培養基后也可進行觀察。
※ 本產品是funakoshi基于京都大學工學研究科浜地格教授·田村朋則講師的研究成果商品化的產品。
※ 本產品僅供研究使用。
◆現有ER染色試劑的問題點以及ERseeing的優勢
過去通用的ER染色試劑是將熒光染料附著于在ER中特異表達的K+ 通道拮抗劑Glibenclamide上，并廣泛用于ER的可視化。然而，由于以下的問題，應用范圍有限。
● 由于Glibenclamide的藥理效果，通道活性被抑制，對細胞的影響大。
● 由于是可逆的拮抗劑，因此通過培養基交換等的清洗操作非常容易去除。
與之相對的，ERseeing是一種新型ER染色試劑，具有與Rhodol綠色熒光染料相連的蛋白標記基團，對ER膜成分具有很高的親和力。通過選擇性地集中在ER上并用熒光基團標記ER蛋白，可以進行不可逆的染色。由于是不可逆的染色，染色后可更換含有FBS的培養基，因此可應用于任何的培養基和試劑處理環境下的長期成像。
傳統產品 | 本產品 | |
原理 | 在ER中發現的ATP敏感性鉀離子通道中 的特異性配體Glibenclamide用熒光標記 后，在與受體結合時實現可視化。 | 將蛋白標記基團添加到Rhodol綠色熒光染 料中，其對ER膜成分具有很高的親和力。 通過對ER上的蛋白質進行熒光標記實現可 視化。 |
對細胞的影響 | 由于Glibenclamide的藥理效果會抑制鉀 離子通道，影響細胞功能。此外，由于依 賴鉀離子通道表達量，有些細胞可能無法 染色。 | 不顯示藥理效果，對細胞功能幾乎沒有 影響。 |
不清洗觀察活細胞 | 良好 | 良好 |
清洗后觀察活細胞 | 靈敏度低 | 良好 |
染色后固定 | 可以，但是存在部分染色靈敏度低的可能性 | 良好 |
◆原著論文
Fujisawa et al., J. Am. Chem. Soc., 140, 17060～17070 (2018). Chemical Profiling of the Endoplasmic Reticulum Proteome Using Designer Labeling Reagents.
◆特點
● 激發/熒光波長：509 nm/524 nm
※ 可利用一般的綠色·色素FTIC的觀察條件
● 與傳統的熒光標記Glibenclamide系染色試劑相比，可以很好地抑制對細胞的影響。
● 即使培養基中含有ERseeing也可以進行觀察。
※ 如果在培養基中長時間染色的話，或許會出現色素呈油滴狀聚集等非特異性染色的情況。若想提高特異性，建議清洗后再觀察。
● 由于是不可逆性染色，染色后可更換培養基。染色后可在含有FBS培養基等的任意培養基中成像。
● 活細胞染色后，也可固定后觀察。還可以與免疫染色法組合使用。
※ 本試劑不適用于固定后細胞的染色。染色請使用活細胞。
◆應用實例
■ ERM的激發·熒光光譜
激發光譜（藍）和熒光光譜（綠）
※ 適用于一般綠色熒光色素FTIC觀察條件
■ 驗證ER特異性
通過與各種細胞器標記共染色評價本試劑的ER特異性。觀察到ERseeing（100 nM）與現有的Glibenclamide系ER染色試劑高度共定位（Pearson相關系數>0.9）。另一方面，未觀察到與溶酶體標記和線粒體標記的共定位。高爾基體標記觀察到部分共定位，可能是本試劑標記的蛋白通過高爾基體轉運，從ER轉移至分泌途徑。然而，添加ER-Golgi轉運抑制劑的話會減少與高爾基體的共定位。（詳情請參考原著論文）
■ 評價細胞內滯留性
向無血清培養基培養的HeLa細胞內添加ERseeing以及傳統的熒光標記Glibenclamide，染色15 min后進行觀察（左）。然后，更換含有10%FBS的培養基再次觀察。熒光標記Glibenclamide在清洗后熒光信號明顯消失了，但是由于ERseeing是不可逆染色的，清洗后也能觀察到很強的熒光信號。使用ERseeing進行ER染色后，可以在含FBS的培養基中培養并進行各種成像。
◆產品列表
| 產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
| FDV-0038 | ERseeing <Endoplasmic Reticulum Green> | 10 nmol |
?ERseeing ＜Endoplasmic Reticulum Green＞
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